生长抑素基因疫苗工程菌保存方法与免疫泌乳后期奶牛的研究

发布时间：2022-12-07 02:29

　　本研究应用以减毒沙门氏菌为载体的新型生长抑素基因疫苗,从工程菌保存和免疫两方面开展研究：第一部分通过比较几种保存方法的效果,旨在开发提高DNA疫苗保存效果的方法,第二部分从免疫剂量方面探讨新型生长抑素DNA疫苗喷雾免疫泌乳后期奶牛的效果和安全性,旨在为生长抑素基因疫苗应用于奶牛提供试验依据。1工程菌的保存方法将发酵离心后的600mLpVGS/2SS-asd初始浓度为8.43×1010cfu/mL的菌液按照低温液态保存、低温干燥保存和冷冻干燥保存,菌液分成三个等份,在不同时期使用活菌平板计数法测定细菌存活率。其中低温液态保存探讨了pH（6.8、7.0、7.4、7.8）、保护剂（蔗糖、葡萄糖、海藻糖）及浓度（3%、5%、10%）、菌液浓度（8.43×1010cfu/mL、 8.43×109cfu/mL、8.43 X 108cfu/mL）等条件下的保存效果；低温干燥保存探讨了100g麸皮中加入不同菌液量（1mL、2mL、L、8mL）的保存效果；冷冻干燥保存探讨了不同冷冻保护剂（A、B、C）和初始菌液浓度（8.43 X 1010cfu/mL、8.43 X 109cfu/mL、8.43×108c... 

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语
第一篇 文献综述
    第一章 工程菌保存方法研究进展
        1 菌种保存主要方法
            1.1 传代培养保存法
                1.1.1 斜面传代培养保存
                1.1.2 高层半固体培养保存
                1.1.3 液体石蜡保存法
            1.2 载体保存法
                1.2.1 砂土保存法
                1.2.2 滤纸法
            1.3 冷冻保存法
                1.3.1 甘油冷冻保存法
                1.3.2 低温冷冻法
            1.4 液氮超低温保存法
            1.5 冷冻干燥保存法
                1.5.1 冷冻保护剂对保存效果的影响
                1.5.2 冻干曲线对保存效果的影响
        2 菌种保存其他方法
            2.1 细菌湿种牛奶冻存法
            2.2 悬液保存法
            2.3 脱纤维羊血冷冻保存法
    第二章 生长抑素基因免疫研究进展
        1 生长抑素基因疫苗的构建和安全性评价
            1.1 生长抑素基因疫苗的构建
            1.2 生长抑素基因疫苗的安全性评价
                1.2.1 基因整合
                1.2.2 抗DNA抗体
                1.2.3 免疫耐受
                1.2.4 免疫佐剂
                1.2.5 其它问题
        2 生长抑素基因疫苗的接种方式和免疫途径研究进展
            2.1 注射免疫
                2.1.1 肌肉注射
                2.1.2 皮内注射
                2.1.3 静脉注射和腹腔注射
            2.2 粘膜免疫
            2.3 基因枪
            2.4 电穿孔
        3 生长抑素基因疫苗的免疫效果研究进展
            3.1 生长抑素基因疫苗促进动物生长
            3.2 生长抑素基因疫苗促进动物泌乳
        4 生长抑素基因疫苗存在的问题和发展前景
            4.1 生长抑素基因疫苗存在的问题
            4.2 生长抑素基因疫苗存在的发展前景
        5 研究目的及意义
第二篇 试验研究
    第三章 工程菌保存方法研究
        1 前言
        2 材料与方法
            2.1 实验菌株
            2.2 溶液配制
            2.3 主要试剂
            2.4 主要仪器设备
            2.5 质粒小提鉴定
            2.6 细菌发酵与浓缩
            2.7 细菌平板计数
            2.8 不同菌种保存方法
            2.9 统计分析
        3 结果与分析
            3.1 不同pH值的细菌存活率
            3.2 不同保护剂及浓度的细菌存活率
            3.3 不同初始浓度的细菌存活率
            3.4 低温干燥保存的细菌存活率
            3.5 菌液冻干后的形状
            3.6 不同冷冻保护剂冷冻干燥保存的细菌存活率
            3.7 三种不同保存方法的比较
        4 讨论
    第四章 生长抑素基因疫苗免疫泌乳后期奶牛的研究
        1 前言
        2 材料与方法
            2.1 基因疫苗和试验动物
            2.2 主要试剂
            2.3 主要溶液配制
            2.4 疫苗制备
            2.5 动物免疫
            2.6 安全性观察
            2.7 样采集
            2.8 抗体效价检测
            2.9 产奶量和DHI检测
            2.10 激素测定
            2.11 统计分析
        3 结果与分析
            3.1 双酶切鉴定结果
            3.2 安全性观察
            3.3 抗体效价和抗体阳性牛比例
            3.4 奶牛日常奶量分析
            3.5 奶牛免疫后不同时期DHI结果分析
            3.6 奶牛免疫12周后GH、PRL、SS结果分析
        4 讨论
全文结论
创新与不足
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]生长抑素基因疫苗对肉用鸡生产性能、屠宰性能及肌肉品质的影响[J]. 舒邓群,王开云,曾检华,魏金刚,吴红翔,韩晓萍.  扬州大学学报(农业与生命科学版). 2011(02)
[2]两种不同的细菌菌种保存方法比较[J]. 干迪郁,任利珍,朱立军.  中国乡村医药. 2010(10)
[3]减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究进展[J]. 陈伟,杨恒.  生物技术通报. 2010(04)
[4]不同保存方法对重组大肠杆菌菌株活性的影响[J]. 周智慧,高波,王升智,岑宁.  安徽农业科学. 2010(01)
[5]几种简易的菌种保存方法[J]. 王娅,金志雄,裴德翠,冯桂香.  青岛医药卫生. 2009(06)
[6]粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）与生长抑素（SS）融合表达质粒的构建及其对小鼠的免疫效果[J]. 舒邓群,茆达干,曹少先,杨利国,吴志敏.  农业生物技术学报. 2008(01)
[7]粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与生长抑素融合表达质粒对断奶仔猪生长及相关激素的影响[J]. 舒邓群,茆达干,陈荣达,吴志敏,杨利国.  南京农业大学学报. 2007(04)
[8]以减毒沙门氏菌为载体的GM-CSF与生长抑素DNA疫苗的安全性和稳定性[J]. 舒邓群,陈荣达,茆达干,吴志敏,杨利国.  中国兽医学报. 2007(06)
[9]生长抑素基因疫苗pES/2SS的构建与表达[J]. 曹少先,何晓红,孙延鸣,刘铁铮,杨利国.  扬州大学学报(农业与生命科学版). 2007(02)
[10]粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因佐剂对DNA疫苗的免疫调节作用[J]. 舒邓群,茆达干,吴志敏,杨利国.  畜牧与兽医. 2007(03)

博士论文
[1]奶牛产后生殖机能恢复与生长抑素基因免疫[D]. 张剑.华中农业大学 2010

硕士论文
[1]pGM-CSF/SS基因免疫对雌鼠生长和繁殖的影响及其安全性研究[D]. 白莉雅.华中农业大学 2008
[2]激生1号在草食动物生产中的推广应用研究[D]. 肖慎华.南京农业大学 2005



本文编号：3712072