鹅细小病毒与鸭圆环病毒共感染增强致病性研究
发布时间：2022-12-07 03:20
鹅细小病毒（GPV）属细小病毒科（parvoviridae）、细小病毒属（parvovirus）,主要引起小鹅瘟,近年来,其在鸭群中可引起鸭大舌短喙综合征。鸭圆环病毒（DuCV）感染可导致宿主免疫抑制,通常与其他病原体共同感染使疾病进展更加复杂。GPV与DuCV共感染在田间广泛存在,但目前对GPV与DuCV共感染对宿主的影响情况不明。为探究GPV和DuCV是否协同增强了致病性,本研究通过临床病例分离鉴定了GPV与DuCV;通过建立GPV与DuCV共感染的动物模型,以病毒学、病理学、分子生物学等方法进行了GPV与DuCV协同复制与协同致病研究。病毒分离鉴定结果显示,分离得到的GPV与DuCV均为当前田间流行株,并制备了GPV多克隆抗体和DuCV多克隆抗体用于实验检测。将GPV与DuCV腹腔接种于2日龄樱桃谷肉鸭,在感染后第10天、第20天和第30天进行剖杀。GPV与DuCV共感染鸭表现精神沉郁,生长发育迟缓,羽毛凌乱,体重增长显著缓慢。血涂片观察可见共感染组鸭血液中异嗜性粒细胞和淋巴细胞明显增多。对血清中各种酶活力指标进行检测,结果发现,感染前期共感染组谷丙转氨酶（ALT）水平显著高于单...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鹅细小病毒研究概述
1.1.1 病毒特征
1.1.2 流行病学研究
1.1.3 临床症状
1.1.4 病理变化
1.2 鸭圆环病毒的研究概述
1.2.1 病原体的特征
1.2.2 流行病学
1.2.3 临床症状
1.2.4 病理变化
1.3 病毒共感染研究进展
1.4 GPV与DuCV共感染研究现状
1.5 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 病毒
2.1.2 鸭胚、细胞和实验动物
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验设备、器材
2.1.5 试验地点
2.2 实验方法
2.2.1 DuCV分离与增殖
2.2.2 GPV分离与增殖
2.2.3 GPV多克隆抗体及DuCV多克隆抗体的制备
2.2.4 GPV、DuCV共感染模型的建立
2.2.5 实验数据分析
3 结果
3.1 病毒分离与增殖
3.1.1 DuCV分离鉴定
3.1.2 DuCV半数感染量（ID50）检测
3.1.3 GPV PCR鉴定
3.1.4 GPV ELISA鉴定
3.1.5 GPV回归动物实验
3.1.6 GPV半数细胞感染量（TCID50）检测
3.2 GPV多克隆抗体制备
3.2.1 GPV vp3基因的获取
3.2.2 GPV VP3重组质粒鉴定
3.2.3 GPV VP3蛋白的诱导表达
3.2.4 GPV VP3蛋白的纯化
3.2.5 GPV VP3蛋白浓度测定
3.2.6 GPV VP3蛋白Western Blot检测
3.2.7 GPV多克隆抗体效价
3.2.8 GPV多克隆抗体验证
3.3 DuCV多克隆抗体制备结果
3.3.1 DuCV cap基因的获取
3.3.2 DuCV CAP重组质粒鉴定
3.3.3 DuCV CAP蛋白的诱导表达
3.3.4 DuCV CAP蛋白的纯化
3.3.5 DuCV CAP蛋白浓度测定
3.3.6 DuCV CAP蛋白Western Blot检测
3.3.7 DuCV多克隆抗体效价
3.3.8 DuCV多克隆抗体验证
3.4 实验动物接种GPV、DuCV共感染的人工致病实验
3.4.1 临床症状
3.4.2 大体病变
3.4.3 血液学检测
3.4.4 病理组织学病变
3.4.5 病毒载量检测
3.4.6 病原分布检测
4 讨论
4.1 GPV、DuCV协同增强致病性
4.2 GPV、DuCV共感染促进双方病毒复制
5.结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国部分地区鸭病毒性疫病共感染的流行病学调查[J]. 杨晶,张日腾,王振忠,于相龙,牛晓宇,唐熠,刁有祥. 中国兽医学报. 2018(10)
[2]鹅细小病毒吉林株的分离鉴定及其全基因序列分析[J]. 孟繁兴,董浩,胡振林,徐浩,邵洪泽,胡桂学. 中国兽医杂志. 2015(12)
[3]鹅细小病毒分子生物学的研究新进展[J]. 孟繁兴,董浩,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2015(23)
[4]樱桃谷肉鸭源鹅细小病毒的分离与鉴定[J]. 陈翠腾,万春和,傅秋玲,傅光华,陈红梅,程龙飞,施少华,刘荣昌,黄瑜. 中国家禽. 2015(23)
[5]鸭圆环病毒基因序列测定与分析研究[J]. 陆文俊,施开创,邹联斌,胡杰,莫胜兰,屈素洁,李军,郑敏. 中国家禽. 2012(16)
[6]山东部分地区肉鸭群鸭圆环病毒血清学调查[J]. 王鑫,相琪旺,朱岩丽,谢之景,陈君豪,周国梅,成岩,姜世金. 中国预防兽医学报. 2012(07)
[7]鹅细小病毒的分子生物学研究进展[J]. 蒋运博,董浩,马磊,徐楠楠,段小波,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2012(05)
[8]犬细小病毒NS1非结构蛋白可诱导细胞凋亡[J]. 潘红丽,仲飞,潘素敏,李秀锦,张峰,张考,陈慧慧. 微生物学报. 2012(03)
[9]鹅细小病毒研究进展[J]. 马磊,董浩,蒋运博,段小波,谷松至,胡桂学. 中国畜牧兽医. 2011(06)
[10]50日龄鹅患小鹅瘟的诊断[J]. 毛文智,孙健,孙强,白翠,袁陆,邵洪泽. 黑龙江畜牧兽医. 2011(04)
博士论文
[1]J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮组织增殖病病毒协同致瘤机制研究[D]. 周德方.山东农业大学 2018
[2]新城疫病毒单感染及猪流感病毒与猪链球菌共感染差异蛋白组学分析[D]. 党源.吉林大学 2013
[3]鸭圆环病毒的分子流行病学调查及诊断方法的建立[D]. 张兴晓.山东农业大学 2009
[4]小鹅瘟强毒在人工感染雏鹅体内侵染规律及对消化道菌群结构影响的分子解析[D]. 杨金龙.四川农业大学 2009
硕士论文
[1]鹅细小病毒与鸭圆环病毒共感染诱发鸭大舌—短喙综合征[D]. 朱东芹.山东农业大学 2017
[2]鹅细小病毒的分离鉴定及其全基因测序及结构蛋白的表达[D]. 徐浩.吉林农业大学 2014
[3]鸭圆环病毒的流行病学调查[D]. 刘少宁.山东农业大学 2009
[4]鹅细小病毒常州株NS1和VP1基因序列分析及NS1基因的表达[D]. 陈希.扬州大学 2007
[5]小鹅瘟病毒强毒株细胞适应毒的培育及其VP3基因的表达[D]. 李清.扬州大学 2007
[6]鹅细小病毒非结构蛋白NS2基因的克隆及原核表达[D]. 邢明伟.东北农业大学 2002
本文编号：3712138
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鹅细小病毒研究概述
1.1.1 病毒特征
1.1.2 流行病学研究
1.1.3 临床症状
1.1.4 病理变化
1.2 鸭圆环病毒的研究概述
1.2.1 病原体的特征
1.2.2 流行病学
1.2.3 临床症状
1.2.4 病理变化
1.3 病毒共感染研究进展
1.4 GPV与DuCV共感染研究现状
1.5 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 病毒
2.1.2 鸭胚、细胞和实验动物
2.1.3 实验试剂
2.1.4 实验设备、器材
2.1.5 试验地点
2.2 实验方法
2.2.1 DuCV分离与增殖
2.2.2 GPV分离与增殖
2.2.3 GPV多克隆抗体及DuCV多克隆抗体的制备
2.2.4 GPV、DuCV共感染模型的建立
2.2.5 实验数据分析
3 结果
3.1 病毒分离与增殖
3.1.1 DuCV分离鉴定
3.1.2 DuCV半数感染量（ID50）检测
3.1.3 GPV PCR鉴定
3.1.4 GPV ELISA鉴定
3.1.5 GPV回归动物实验
3.1.6 GPV半数细胞感染量（TCID50）检测
3.2 GPV多克隆抗体制备
3.2.1 GPV vp3基因的获取
3.2.2 GPV VP3重组质粒鉴定
3.2.3 GPV VP3蛋白的诱导表达
3.2.4 GPV VP3蛋白的纯化
3.2.5 GPV VP3蛋白浓度测定
3.2.6 GPV VP3蛋白Western Blot检测
3.2.7 GPV多克隆抗体效价
3.2.8 GPV多克隆抗体验证
3.3 DuCV多克隆抗体制备结果
3.3.1 DuCV cap基因的获取
3.3.2 DuCV CAP重组质粒鉴定
3.3.3 DuCV CAP蛋白的诱导表达
3.3.4 DuCV CAP蛋白的纯化
3.3.5 DuCV CAP蛋白浓度测定
3.3.6 DuCV CAP蛋白Western Blot检测
3.3.7 DuCV多克隆抗体效价
3.3.8 DuCV多克隆抗体验证
3.4 实验动物接种GPV、DuCV共感染的人工致病实验
3.4.1 临床症状
3.4.2 大体病变
3.4.3 血液学检测
3.4.4 病理组织学病变
3.4.5 病毒载量检测
3.4.6 病原分布检测
4 讨论
4.1 GPV、DuCV协同增强致病性
4.2 GPV、DuCV共感染促进双方病毒复制
5.结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]我国部分地区鸭病毒性疫病共感染的流行病学调查[J]. 杨晶,张日腾,王振忠,于相龙,牛晓宇,唐熠,刁有祥. 中国兽医学报. 2018(10)
[2]鹅细小病毒吉林株的分离鉴定及其全基因序列分析[J]. 孟繁兴,董浩,胡振林,徐浩,邵洪泽,胡桂学. 中国兽医杂志. 2015(12)
[3]鹅细小病毒分子生物学的研究新进展[J]. 孟繁兴,董浩,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2015(23)
[4]樱桃谷肉鸭源鹅细小病毒的分离与鉴定[J]. 陈翠腾,万春和,傅秋玲,傅光华,陈红梅,程龙飞,施少华,刘荣昌,黄瑜. 中国家禽. 2015(23)
[5]鸭圆环病毒基因序列测定与分析研究[J]. 陆文俊,施开创,邹联斌,胡杰,莫胜兰,屈素洁,李军,郑敏. 中国家禽. 2012(16)
[6]山东部分地区肉鸭群鸭圆环病毒血清学调查[J]. 王鑫,相琪旺,朱岩丽,谢之景,陈君豪,周国梅,成岩,姜世金. 中国预防兽医学报. 2012(07)
[7]鹅细小病毒的分子生物学研究进展[J]. 蒋运博,董浩,马磊,徐楠楠,段小波,胡桂学. 黑龙江畜牧兽医. 2012(05)
[8]犬细小病毒NS1非结构蛋白可诱导细胞凋亡[J]. 潘红丽,仲飞,潘素敏,李秀锦,张峰,张考,陈慧慧. 微生物学报. 2012(03)
[9]鹅细小病毒研究进展[J]. 马磊,董浩,蒋运博,段小波,谷松至,胡桂学. 中国畜牧兽医. 2011(06)
[10]50日龄鹅患小鹅瘟的诊断[J]. 毛文智,孙健,孙强,白翠,袁陆,邵洪泽. 黑龙江畜牧兽医. 2011(04)
博士论文
[1]J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮组织增殖病病毒协同致瘤机制研究[D]. 周德方.山东农业大学 2018
[2]新城疫病毒单感染及猪流感病毒与猪链球菌共感染差异蛋白组学分析[D]. 党源.吉林大学 2013
[3]鸭圆环病毒的分子流行病学调查及诊断方法的建立[D]. 张兴晓.山东农业大学 2009
[4]小鹅瘟强毒在人工感染雏鹅体内侵染规律及对消化道菌群结构影响的分子解析[D]. 杨金龙.四川农业大学 2009
硕士论文
[1]鹅细小病毒与鸭圆环病毒共感染诱发鸭大舌—短喙综合征[D]. 朱东芹.山东农业大学 2017
[2]鹅细小病毒的分离鉴定及其全基因测序及结构蛋白的表达[D]. 徐浩.吉林农业大学 2014
[3]鸭圆环病毒的流行病学调查[D]. 刘少宁.山东农业大学 2009
[4]鹅细小病毒常州株NS1和VP1基因序列分析及NS1基因的表达[D]. 陈希.扬州大学 2007
[5]小鹅瘟病毒强毒株细胞适应毒的培育及其VP3基因的表达[D]. 李清.扬州大学 2007
[6]鹅细小病毒非结构蛋白NS2基因的克隆及原核表达[D]. 邢明伟.东北农业大学 2002
本文编号：3712138
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