猪繁殖与呼吸综合征血清抗体检测试剂盒的研制
发布时间：2022-12-08 22:18
猪繁殖与呼吸综合征于1987年最早在美国发现,1996年我国也发现该病,现在已成为全世界流行最广的猪病之一,给猪养殖业造成巨大损失,所以对该病的诊断与预防显得尤为重要。该病的诊断方法很多,抗体检测方法有EILSA、IFA、IPMA、 SVN,抗原检测方法有PCR、实时荧光定量PCR。与其他方法做比较,ELISA方法更容易操作,用时短,敏感,适合用于进行流行病学调查和疫苗免疫效果的评价。 PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒,属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属的成员,基因组大小约为15kb,包括5’端非编码区（Untranslated region. UTR）,9个开放阅读框架（ORFla, ORFlb. ORF2a. ORF2b, ORF3-7）,和3’端UTR。其中ORF1编码病毒依赖RNA的RNA聚合酶,ORF2a-7编码6个膜相关蛋白（GP2a, GP2b, GP3, GP4, GP5, M）和核衣壳蛋白N。囊膜蛋白（E）又称GP5蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,分子量约25kDa。研究表明GP5蛋白能刺激机体产生中和抗体,且中和抗体出现之后,抗血清主要识别E蛋白。此外,E蛋...
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 猪繁殖与呼吸综合征简介
1.2 猪繁殖与呼吸综合征研究进展
1.2.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒
1.2.2 PRRSV的抗原性
1.3 PRRSV分子生物学研究进展
1.3.1 PRRSV基因组结构与功能
1.3.2 PRRSV的蛋白质
1.4 PRRS诊断方法研究进展
1.4.1 病原学诊断
1.4.2 血清学诊断方法
1.4.3 分子生物学诊断
1.5 PRRS疫苗研究进展
1.5.1 弱毒活疫苗
1.5.2 PRRS灭活疫苗
1.5.3 基因工程疫苗
1.6 本研究的意义
第二章 猪繁殖与呼吸综合征GP5基因的克隆与序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 病料
2.1.2 克隆菌种与载体
2.1.3 酶和试剂
2.1.4 溶液及其配制
2.1.5 仪器
2.2 实验方法
2.2.1 引物的设计与合成
2.2.2 RNA的提取、反转录
2.2.3 反转录
2.2.4 PCR扩增目的基因
2.2.5 PCR产物的回收与纯化
2.2.6 目的基因的克隆
2.2.7 重组质粒的提取与鉴定
2.3 结果
2.3.1 基因扩增
2.3.2 基因克隆
2.3.3 重组质粒的序列分析
2.4 讨论
第三章 猪繁殖与呼吸综合征GP5的表达纯化与活性分析
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 感受态细胞、原核表达载体
3.1.3 酶和试剂
3.1.4 仪器
3.1.5 培养基
3.2 实验方法
3.3 结果
3.3.1 表达用引物PCR扩增产物
3.3.2 重组表达质粒的鉴定
3.3.3 表达产物的SDS—PAGE电泳
3.3.4 表达产物的可溶性分析、包涵体的收集与纯化
3.3.5 纯化蛋白的浓度测定
3.3.6 WESTERN-BLOT分析
3.3.7 免疫实验结果
3.4 讨论
第四章 猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA检测方法的建立
4.1 材料与方法
4.1.1 试剂与材料
4.1.2 仪器
4.1.3 间接ELISA操作流程
4.1.4 标准血清的制备
4.1.5 间接ELISA最佳工作条件的确定
4.2 结果
4.2.1 间接ELISA最佳工作条件的确定
4.3 讨论
第五章 猪繁殖与呼吸综合征ELISA抗体检测试剂盒生产工艺研究报告
5.1 原料与半成品制造
5.1.1 生产用种子的制备
5.1.2 生产抗原的制备
5.1.3 标准血清的制备
5.1.4 间接ELISA最佳反应条件的确定
5.1.5 酶标板包被
5.1.6 试剂盒保存期实验
5.1.7 几种试剂的配置
5.2 试剂盒成品制造
5.2.1 试剂盒包装
5.2.2 试剂盒组成
5.2.3 作用和用途
5.2.4 用法和判定
5.2.5 贮藏
5.2.6 规格
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征商品化疫苗现状[J]. 张海明. 中国猪业. 2012(07)
[2]猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗研究进展[J]. 吴佳俊,遇秀玲,蒋桃珍,田克恭. 中国预防兽医学报. 2010(08)
[3]猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建[J]. 赵永刚,薛强,周艳君,仇华吉,萨仁高娃,童光志,申之义. 中国动物检疫. 2009(05)
[4]猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫[J]. 任慧英,郭鑫,杨汉春,王芳,赵东升,杜希珍. 中国农业科学. 2006(08)
[5]PRRS免疫防制面临的困惑与未来[J]. 仇华吉,童光志. 中国兽医学报. 2000(01)
[6]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
[7]哈兽研所首次证实国内猪群存在PRRSV感染[J]. 郭宝清 ,陈章水. 兽医科技信息. 1996(01)
本文编号：3714236
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 猪繁殖与呼吸综合征简介
1.2 猪繁殖与呼吸综合征研究进展
1.2.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒
1.2.2 PRRSV的抗原性
1.3 PRRSV分子生物学研究进展
1.3.1 PRRSV基因组结构与功能
1.3.2 PRRSV的蛋白质
1.4 PRRS诊断方法研究进展
1.4.1 病原学诊断
1.4.2 血清学诊断方法
1.4.3 分子生物学诊断
1.5 PRRS疫苗研究进展
1.5.1 弱毒活疫苗
1.5.2 PRRS灭活疫苗
1.5.3 基因工程疫苗
1.6 本研究的意义
第二章 猪繁殖与呼吸综合征GP5基因的克隆与序列分析
2.1 实验材料
2.1.1 病料
2.1.2 克隆菌种与载体
2.1.3 酶和试剂
2.1.4 溶液及其配制
2.1.5 仪器
2.2 实验方法
2.2.1 引物的设计与合成
2.2.2 RNA的提取、反转录
2.2.3 反转录
2.2.4 PCR扩增目的基因
2.2.5 PCR产物的回收与纯化
2.2.6 目的基因的克隆
2.2.7 重组质粒的提取与鉴定
2.3 结果
2.3.1 基因扩增
2.3.2 基因克隆
2.3.3 重组质粒的序列分析
2.4 讨论
第三章 猪繁殖与呼吸综合征GP5的表达纯化与活性分析
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 感受态细胞、原核表达载体
3.1.3 酶和试剂
3.1.4 仪器
3.1.5 培养基
3.2 实验方法
3.3 结果
3.3.1 表达用引物PCR扩增产物
3.3.2 重组表达质粒的鉴定
3.3.3 表达产物的SDS—PAGE电泳
3.3.4 表达产物的可溶性分析、包涵体的收集与纯化
3.3.5 纯化蛋白的浓度测定
3.3.6 WESTERN-BLOT分析
3.3.7 免疫实验结果
3.4 讨论
第四章 猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA检测方法的建立
4.1 材料与方法
4.1.1 试剂与材料
4.1.2 仪器
4.1.3 间接ELISA操作流程
4.1.4 标准血清的制备
4.1.5 间接ELISA最佳工作条件的确定
4.2 结果
4.2.1 间接ELISA最佳工作条件的确定
4.3 讨论
第五章 猪繁殖与呼吸综合征ELISA抗体检测试剂盒生产工艺研究报告
5.1 原料与半成品制造
5.1.1 生产用种子的制备
5.1.2 生产抗原的制备
5.1.3 标准血清的制备
5.1.4 间接ELISA最佳反应条件的确定
5.1.5 酶标板包被
5.1.6 试剂盒保存期实验
5.1.7 几种试剂的配置
5.2 试剂盒成品制造
5.2.1 试剂盒包装
5.2.2 试剂盒组成
5.2.3 作用和用途
5.2.4 用法和判定
5.2.5 贮藏
5.2.6 规格
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征商品化疫苗现状[J]. 张海明. 中国猪业. 2012(07)
[2]猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗研究进展[J]. 吴佳俊,遇秀玲,蒋桃珍,田克恭. 中国预防兽医学报. 2010(08)
[3]猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建[J]. 赵永刚,薛强,周艳君,仇华吉,萨仁高娃,童光志,申之义. 中国动物检疫. 2009(05)
[4]猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因对猪的DNA免疫[J]. 任慧英,郭鑫,杨汉春,王芳,赵东升,杜希珍. 中国农业科学. 2006(08)
[5]PRRS免疫防制面临的困惑与未来[J]. 仇华吉,童光志. 中国兽医学报. 2000(01)
[6]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
[7]哈兽研所首次证实国内猪群存在PRRSV感染[J]. 郭宝清 ,陈章水. 兽医科技信息. 1996(01)
本文编号：3714236
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3714236.html
