包虫抗原Eg95的原核表达及重组BCG-Eg95的构建

发布时间：2022-12-10 07:52

　　包虫病又称棘球蚴病,是由细粒棘球绦虫中绦期幼虫寄生于人及家畜而引起的一种人兽共患寄生虫病。该病已成为全球性的公共卫生问题,我国是主要流行国家之一。控制包虫病最理想的方法是疫苗免疫接种,动物实验证实Eg95诱导绵羊抗六钩蚴感染的保护率在90%以上。目的:克隆Eg95基因至pET30a质粒,在大肠杆菌中表达Eg95蛋白;构建并鉴定重组BCG-Eg95。方法:（1）将Eg95目的片段和质粒pET30a分别用EcoⅠ/Hind Ⅲ及Nde Ⅰ/Hind Ⅲ限制酶消化,酶切产物T4DNA连接酶连接过夜;连接产物转化E.coli.DH5α后进行阳性克隆筛选、菌液PCR、质粒双酶切和测序鉴定;构建成功的重组子转化E.coli.BL21,IPTG诱导其表达,表达蛋白纯化;（2）将Eg95目的片段和质粒pMV261分别用EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ限制酶消化,酶切产物T4DNA连接酶连接过夜;连接产物转化E.coli.DH5α后进行阳性克隆筛选、菌液PCR、质粒双酶切和测序鉴定;用电穿孔法将重组质粒导入BCG感受态细胞,重组菌进行阳性克隆筛选、抗酸染色、PCR鉴定;重组菌热诱导培养。结果:（1）1%琼脂糖... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

}5基因PCR扩增结果

图２质粒ｐＵＣ５７－ＥＧ９５酶切结果

图３质粒ｐＭＶ２６１及ｐＥＴ３０ａ电泳图??注：Ｍ：?１００ｂｐ?ＤＮＡ?ｌａｄｄｅｒ；?ｌ，２，３：ｐＵＣ５７－Ｅｇ９５?注：Ｍ：?Ｗｉｄｅ?Ｒａｎｇｅ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ（ｌ００－６０００）；??

【参考文献】：
期刊论文
[1]结核分枝杆菌抗原蛋白ESAT-6基因重组穿梭质粒的构建与鉴定[J]. 陈玮,鲍朗,谢勇恩,胡昌华,张万江,李学敏,张会东.  华西医科大学学报. 2002(01)
[2]细粒棘球蚴Eg95全长基因的克隆与在甲醇酵母中的表达[J]. 胡旭初,徐劲,陆家海,陈守义,余新炳.  热带医学杂志. 2003(01)
[3]重组BCG疫苗的研究进展[J]. 郑春福.  生命科学. 2000(02)
[4]Eg95基因疫苗不同免疫途径的体液免疫应答比较[J]. 丁剑冰,魏晓丽,林仁勇,温浩,阿孜古丽·吐尔逊,张亚楼,王国荃.  新疆医科大学学报. 2003(03)
[5]重组卡介苗的研究与应用[J]. 陈向东,吴梧桐.  药学进展. 2003(05)
[6]青海省羊源细粒棘球蚴EG95基因的克隆与序列分析[J]. 韩秀敏,史大中,贾万忠,杨永海,王虎.  中国兽医科技. 2004(01)
[7]细粒棘球蚴95（Eg95）抗原基因的克隆及真核表达质粒的构建[J]. 丁剑冰,林仁勇,温浩,王国荃,王笑峰,魏晓丽,傅玉才.  中国人兽共患病杂志. 2003(01)
[8]细粒棘球绦虫EG95基因的克隆和序列分析[J]. 郭中敏,陆家海,陈慧红,徐劲,余新炳.  中国人兽共患病杂志. 2003(06)
[9]THE CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF RECOMBINANT SHUTTLE PLASMID WITH OMPL1 GENE FROM LEPTOSPIRA INTERROGANS SEROVAR LAI STRAIN 017 IN BACILLE CALMETTE-GUERIN[J]. 鲍朗 ,邱洪宇 ,晏菊芳 ,谢勇恩 ,陈玮.  Chinese Medical Sciences Journal. 2002(02)
[10]细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗的构建及其表达效率研究[J]. 李文桂,朱佑明.  免疫学杂志. 2007(05)

博士论文
[1]细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗构建及其免疫机制研究[D]. 周必英.重庆医科大学 2010



本文编号：3716372