传染性法氏囊病病毒自然重配超强毒株的分离及其VP2和VP3基因的克隆表达

发布时间：2022-12-10 20:44

　　传染性法氏囊病（Infectious bursal disease, IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV）引起的以侵害雏鸡淋巴组织尤其是中枢免疫器官—法氏囊为主要特征的一种急性、高度接触性传染病。该病主要侵害机体免疫器官,造成免疫抑制,致使疫苗免疫接种失败。2004年以来,在华东地区商品代蛋鸡场和肉鸡场发生了多起IBD疫情,在流行病学与临床症状方面表现为IBD疫苗免疫失败、发病快、死亡率高。本实验室从具有该流行病学特征的病鸡法氏囊组织中分离到了两株IBDV自然重配超强毒株,分别命名为QL和ZZ-11,并对其致病力特性、全基因组序列特征进行了研究,最后对其主要结构蛋白基因VP2和VP3进行了克隆表达,并建立了IBDV抗体间接ELISA检测方法。试验内容包括： 实验一：传染性法氏囊病病毒超强毒株的分离鉴定 从接种过IBDV B87疫苗的发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒（IBDV）,分别命名为QL和ZZ-11。用该原始病鸡法氏囊悬液连续3次人工感染SPF鸡后,再取其法氏囊制备悬液,-70℃保存。经绒毛尿... 

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
目录
摘要
ABSTRACT
縮略语表(Abbreviation)
第一篇 文献综述
    第一章 传染性法氏囊病的研究进展
        1 概述
        2 病原学
            2.1 病毒分类
            2.2 基因组结构
            2.3 病毒分离鉴定
            2.4 理化特性
            2.5 培养特性
        3 病原检测方法
            3.1 琼脂扩散试验(AGP)
            3.2 免疫荧光试验(IFA)
            3.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)
            3.4 中和试验(VN)
            3.5 反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)
            3.6 核酸探针技术(NP)
        4 防控
            4.1 基本措施
            4.2 疫苗
    参考文献
第二篇 试验研究
    第二章 传染性法氏囊病病毒超强毒株的分离鉴定
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 主要试剂和动物
            1.2 病料来源与处理
            1.3 病毒的分离
            1.4 病毒的鉴定
            1.5 病毒对SPF鸡的致病性
            1.6 病毒对SPF鸡胚的适应性
            1.7 病毒对鸡胚成纤维细胞(CEF)的适应性
            1.8 VP2高变区序列分析
        2 结果
            2.1 病毒的分离鉴定
            2.2 病毒对SPF鸡的致病性
            2.3 病毒对SPF鸡胚适应性
            2.4 病毒对CEF的适应性
            2.5 VP2基因高变区的氨基酸序列
            2.6 VP2基因系统进化树分析
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第三章 传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析
        摘要
        1 材料和方法
            1.1 主要试剂和试验动物
            1.2 病料来源及处理
            1.3 病料纯化与病毒检测
            1.4 对鸡的致病力测定
            1.5 对鸡胚和鸡胚成纤维细胞的适应性试验
            1.6 病毒全基因组序列测定分析
        2 结果
            2.1 对鸡的致病力测定
            2.2 对鸡胚和鸡胚成纤维细胞的适应性试验
            2.3 病毒全基因组序列测定
            2.4 全基因组核苷酸序列遗传演化分析
            2.5 多聚蛋白VP2-4-3和VP1的氨基酸序列遗传演化分析
            2.6 超强毒株和弱毒株特征氨基酸与酶切位点比较
            2.7 VP2基因编码特征氨基酸分析
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第四章 传染性法氏囊病病毒自然重配超强毒株VP2和VP3基因的克隆表达
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 主要试剂
            1.2 VP2和VP3基因的克隆
            1.3 原核表达质粒的构建
            1.4 原核表达质粒的诱导表达
            1.5 表达产物的鉴定
            1.6 表达产物的纯化
            1.7 间接ELISA检测方法的建立
        2 结果
            2.1 VP2和VP3基因序列特性分析
            2.2 VP2基因和VP3基因原核表达质粒的鉴定
            2.3 pET32a-VP2和pET32a-VP3的诱导表达
            2.4 表达产物的鉴定
            2.5 间接ELISA检测方法的建立比较
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
附录：常用试剂的配制
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录



本文编号：3717485