肝片吸虫诊断候选抗原的筛选

发布时间：2022-12-11 16:41

　　旨在筛选出肝片吸虫诊断候选抗原,拓展诊断肝片吸虫感染引起的肝吸虫病的靶点。通过蛋白免疫印迹试验从肝片吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库中筛选出肝片吸虫特异性抗原基因,对阳性克隆进行测序和生物信息学分析。克隆特异性抗原基因,并连接表达载体pET-32a（+）,构建重组质粒,转化至BL21（DE3）感受态细胞,通过IPTG诱导重组蛋白表达,用SDS-PAGE和Western-blot验证其表达情况。结果表明,共计获得了18个阳性克隆。通过候选抗原核酸序列同源性比较,发现肝片吸虫假定蛋白D915₀00758具有完整的开放阅读框。经生物信息学分析,发现该蛋白cDNA全长为345 bp,编码114个氨基酸。成功扩增出该特异性抗原基因,SDS-PAGE结果表明重组蛋白pET-Fh以包涵体形式表达,分子质量大小约为32 ku;Western-blot证明该重组蛋白可以被肝片吸虫阳性血清特异性识别。结果提示,假定蛋白D915₀00758可作为潜在的肝片吸虫病诊断候选抗原,应用于肝片吸虫感染引起的肝吸虫病的诊断技术中。 

【文章页数】：8 页

【参考文献】：
期刊论文
[1]肝片吸虫MeCatL-B融合基因的构建、表达及其间接ELISA检测方法的建立[J]. 王熙凤,孟庆玲,乔军,张凯,张国武,贡莎莎,黄运福,才学鹏.  中国预防兽医学报. 2019(03)
[2]肝片吸虫CatB4蛋白分子特征及其免疫原性分析[J]. 王熙凤,孟庆玲,乔军,张凯,张国武,贡莎莎,黄运福,才学鹏.  南方农业学报. 2019(01)
[3]肝片吸虫cDNA文库构建及诊断候选抗原基因筛选[J]. 刘天,李新,宫鹏涛,张西臣,杨举,李赫,李建华.  中国病原生物学杂志. 2019(01)
[4]肝片吸虫CatL1D蛋白的免疫原性研究[J]. 王熙凤,孟庆玲,乔军,陈英,钟文强,贡莎莎,黄运福,才学鹏.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2019(05)
[5]片形吸虫分子检测技术的研究进展[J]. 袁晓丹,黄思扬,田艾灵,朱兴全,王春仁.  中国兽医科学. 2019(02)
[6]片形吸虫排泄分泌产物的研究进展[J]. 田艾灵,朱兴全,黄思扬.  畜牧兽医学报. 2017(02)
[7]肝片吸虫病的研究进展[J]. 张吉丽,朱阵,李冰,周绪正,张继瑜.  黑龙江畜牧兽医. 2016(11)
[8]肝片形吸虫重组组织蛋白酶L的免疫反应性和免疫原性分析[J]. 冉旭华,闻晓波,王春仁,李晓娟,魏晓曼.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2014(04)
[9]肝片吸虫的特性及肝片吸虫病的预防与治疗[J]. 谢凤云,张钦凯,王百川,潘庆杰.  畜牧与饲料科学. 2014(01)
[10]旋毛虫组织蛋白酶B基因TsCB1的克隆与生物信息学分析[J]. 谢志宙,李文卉,曲自刚,刘静宜,高小磊,岳龙,张德林,付宝权.  中国兽医科学. 2013(07)

硕士论文
[1]肝片吸虫病诊断抗原的筛选及间接ELISA方法的建立[D]. 王晓旭.黑龙江八一农垦大学 2019
[2]三种肝片形吸虫诊断抗原的表达及ELISA诊断方法的建立[D]. 刘明旭.东北农业大学 2019



本文编号：3719131