牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白原核表达纯化及多克隆抗体的制备

发布时间：2022-12-21 23:06

　　原核表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）NS3蛋白,并以此免疫动物制备多克隆抗体。对BVDV NS3蛋白的抗原决定簇氨基酸序列分析,构建重组质粒pET30a-NS3,转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中,使用IPTG诱导目的蛋白表达。选择最优诱导条件对目的蛋白进行亲和纯化,目的蛋白主要以包涵体形式表达,从而获得NS3蛋白。使用NS3蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗NS3蛋白多克隆抗体,采用ELISA方法检测多克隆抗体效价。结果显示,成功表达并纯化出BVDV NS3蛋白,制备的兔抗NS3蛋白多克隆抗体效价大于1∶128 000,为建立BVDV抗体/抗原检测方法及疫苗的研究奠定了基础。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 试剂
        1.1.2 实验动物
        1.1.3 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 NS3序列分析
        1.2.2 基因合成构建及鉴定
        1.2.3 NS3蛋白的原核表达
        1.2.4 制备多克隆抗体及纯化
        1.2.5 多克隆抗体鉴定
2 结果
    2.1 NS3抗原分析
    2.2 重组质粒载体pET30a-NS3的诱导表达
    2.3 NS3蛋白纯化及特异性检测
    2.4 抗NS3蛋白多克隆抗体的测定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]黄病毒NS2-3/NS3蛋白的结构与功能[J]. 郑杰,赵启祖,赵耘,宁宜宝.  病毒学报. 2007(03)
[2]梅花鹿源BVDV NS2-3基因重要区的克隆与序列分析[J]. 温铁锋,郜玉钢,王树志,杜锐.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2006(01)

硕士论文
[1]牛病毒性腹泻病毒蛋白对其非编码区的调节作用[D]. 宋现梅.山东师范大学 2018
[2]BVDV-2分离株XJ-04全基因组测序和抗BVDV单克隆抗体制备及初步应用[D]. 林燕清.扬州大学 2010



本文编号：3722946