猪流行性腹泻病毒HBMC/2012株的致病性与免疫研究

发布时间：2023-01-08 19:27

　　猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起猪的一种高度接触性的急性肠道传染病,主要以呕吐、水样腹泻和脱水为特征。2010年以来,我国多个地区突然爆发由PEDV变异株引起的初生仔猪腹泻,其临床症状、发病率和死亡率均较此前常见的PED严重,给养猪业造成了巨大的经济损失。目前对PEDV的致病性与免疫特征了解不够深入,缺乏标准防控程序,本研究旨在探索PEDV流行毒株与宿主间的感染免疫特性,为进一步阐明该病的发病机制奠定基础。用自河北省某猪场分离的PEDV HBMC/2012株分别感染3日龄和21日龄健康仔猪,评价该毒株的致病性。3日龄仔猪感染后2-3 d（dpi）出现严重的腹泻和呕吐等典型症状,持续3 d左右逐渐好转,感染后8 h即可在肛拭子中检测到病毒,并一直持续到实验结束（13 d）。剖检可见小肠壁变薄,肠绒毛脱落或增粗,内充满淡黄色内容物,部分小肠内充满气体,肠系膜淋巴结出血。21日龄仔猪的临床表现较3日龄仔猪轻,感染后2 d出现不同程度的腹泻,没有出现呕吐症状,病理变化也较轻。感染后3、7 d在血清和肠道内可检测到病毒核酸,感染后23 d在相应样品内未检测到。免疫组化检... 

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 猪流行性腹泻概述
        1.1.1 PEDV及其主要分子特征
        1.1.2 培养特性
        1.1.3 流行特征与致病性
        1.1.4 防治
    1.2 肠免疫屏障
        1.2.1 肠黏膜屏障的构成
        1.2.2 肥大细胞
        1.2.3 CD163
        1.2.4 MUC2
        1.2.5 炎症中的细胞性渗出物
        1.2.6 肠道黏膜免疫调节机制
    1.3 研究内容和技术路线
        1.3.1 研究内容
        1.3.2 技术路线
    1.4 研究目的与意义
    1.5 研究目标
2 材料
    2.1 细胞及毒株
    2.2 实验动物
    2.3 主要试剂
        2.3.1 细胞培养用溶液
        2.3.2 琼脂糖凝胶电泳用溶液
        2.3.3 淋巴细胞增殖试验用溶液
        2.3.4 流式细胞术所用的标记抗体
        2.3.5 肠系膜淋巴结细胞分离用溶液
        2.3.6 组织切片与免疫组化用试剂
        2.3.7 其它试剂
    2.4 主要仪器
3 方法
    3.1 引物的设计与合成
    3.2 PEDV HBMC/2012 株细胞毒的制备
    3.3 实验动物的分组与感染
        3.3.1 动物感染实验Ⅰ
        3.3.2 动物感染实验Ⅱ
    3.4 样品的采集与处理
    3.5 肉眼及组织学病理检测
        3.5.1 肉眼病理检查
        3.5.2 组织病理变化检查
    3.6 病毒检测
        3.6.1 RT-PCR方法
        3.6.2 免疫组化方法
    3.7 抗体检测
    3.8 淋巴细胞增殖实验
        3.8.1 外周血淋巴细胞的分离
        3.8.2 肠系膜淋巴结细胞的分离
        3.8.3 淋巴细胞增殖试验——MTT法
    3.9 免疫细胞亚群含量的流式细胞术检测
    3.10 肠黏膜中MC及具有CD163、MUC2 和SWC1A、SWC8 分子标志免疫细胞的检测
4 结果与分析
    4.1 临床症状
    4.2 肉眼与组织病变
    4.3 病毒血症
    4.4 病毒排出
    4.5 病毒在组织中的分布
    4.6 血清中PEDV抗体动态
    4.7 外周血淋巴细胞及肠系膜淋巴结细胞的增殖活性
        4.7.1 外周血淋巴细胞的增殖活性
        4.7.2 PEDV感染仔猪肠系膜淋巴结细胞的增殖活性
    4.8 PEDV感染仔猪外周血T淋巴细胞亚群的含量变化
    4.9 肠黏膜中MC及具有CD163、MUC2 和SWC1A、SWC8 分子标志免疫细胞的检测结果
        4.9.1 MC在肠黏膜中的分布
        4.9.2 具有CD163 标志的免疫细胞在肠黏膜中的分布
        4.9.3 具有MUC2 标志的免疫细胞在肠黏膜中的分布
        4.9.4 具有SWC1a、SWC8 标志的免疫细胞在肠黏膜中的分布
5 讨论
    5.1 PEDV的致病性
        5.1.1 临床症状及病理变化
        5.1.2 病毒血症、排出及其在仔猪组织中的分布
    5.2 PEDV HBMC/2012 的免疫学特性
        5.2.1 全身免疫特性
        5.2.2 局部免疫研究
6 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文及获得的奖励
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]CD64/CD163指数的临床研究现状[J]. 熊小敏,李薇.  华南国防医学杂志. 2013(11)
[2]猪流行性腹泻新毒株的分离鉴定和致病性研究[J]. 张志,李岚,王赛赛,刘爽,吴发兴,郑辉,李蕾,张燕霞,李晓成.  中国兽医学报. 2012(10)
[3]嗜碱性粒细胞在过敏反应和固有免疫应答中的作用研究新进展[J]. 许强,沈弢.  细胞与分子免疫学杂志. 2012(09)
[4]用三色间接流式细胞术检测猪外周血白细胞亚群[J]. 戴志红,赵耘,宁宜宝,秦玉明,谢磊,张广川,范学政,王在时,张仲秋.  中国兽药杂志. 2010(01)
[5]断奶仔猪肠黏膜免疫与功能性氨基酸的营养[J]. 高玉云,余钗,袁智勇,陈启青.  饲料工业. 2010(01)
[6]猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析[J]. 吕茂杰,冯力,时洪艳,陈建飞,孙东波,申识川,崔小辰,王承宝,范秀萍.  畜牧兽医学报. 2009(05)
[7]我国主要猪病毒性腹泻疾病的现状和对策[J]. 冯力,佟有恩,李伟杰,朱远茂.  畜牧市场. 2009(03)
[8]肠道黏膜免疫研究进展[J]. 丁轲,余祖华,王天奇.  动物医学进展. 2007(10)
[9]猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株S基因的克隆、序列分析及线性抗原表位区的鉴定[J]. 孙东波,冯力,陈建飞,时洪艳,佟有恩,刘胜旺,陈洪岩.  病毒学报. 2007(03)
[10]猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展[J]. 孙东波,冯力,时洪艳,陈建飞.  动物医学进展. 2006(10)

博士论文
[1]猪流行性腹泻病毒全基因组序列分析及感染性cDNA克隆的构建[D]. 陈建飞.中国农业科学院 2012
[2]猪流行性腹泻病毒主要结构蛋白不同抗原片段在重组干酪乳杆菌中的表达及其免疫学评价[D]. 葛俊伟.东北农业大学 2008

硕士论文
[1]新生仔猪流行性腹泻病理学观察及发病相关因素调查[D]. 任庆海.山东农业大学 2013
[2]猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其S基因和N基因的序列分析[D]. 何鑫.四川农业大学 2012
[3]猪流行性腹泻病毒地方流行株LJB/03部分生物学特性研究[D]. 毛雅元.东北农业大学 2010
[4]猪氨基肽酶在MDCK细胞中的表达与鉴定[D]. 杨殿奎.东北农业大学 2008
[5]嗜酸性粒细胞抗肿瘤作用及其机制的初步研究[D]. 郭君.兰州大学 2008
[6]MUC2在溃疡性结肠炎发病机制中的研究[D]. 于晓丽.山东大学 2005



本文编号：3729041