miR-200c介导MAPK8基因调控哈萨克羊卵泡发育的机制研究

发布时间：2023-01-15 20:47

　　目的:本试验以研究哈萨克羊季节性发情的调控机制为目的,通过生物信息学的方法筛选,以期得到与非繁殖季节哈萨克羊卵巢发育相关的差异microRNA及基因,研究靶基因的生物学功能,并在细胞水平上进行验证,深入探讨其在非繁殖季节哈萨克羊的卵巢发育的调控机制,为丰富绵羊季节性发情的分子机制奠定基础。方法:（1）本课题组前期建立了以非繁殖季节乏情绵羊（AN）为对照组,以非繁殖季节发情绵羊（EN）为实验组的卵巢（O）组织microRNA文库和mRNA文库。通过生物信息学的方法分析miRNA文库数据筛选得到差异性表达的miRNA,预测其靶标基因;将预测结果与mRNA文库进行深度挖掘联合分析筛选获得差异表达的靶标基因。（2）构建MAPK8基因野生型和突变型双荧光素酶载体,验证miR-200c对靶基因MAPK8的靶向调控作用。（3）在绵羊卵巢颗粒细胞中转染miR-200c mimics和miR-200c mimics inhibition,用实时荧光定量PCR检测靶基因MAPK8和部分差异表达的发情相关基因mRNA表达水平变化。（4）在哈萨克羊卵巢颗粒细胞中转染miR-200c mimics、miR-20... 

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
    1 论文研究的目的与意义
    2 文献综述
        2.1 绵羊发情相关研究进展
        2.2 MicroRNAs的研究进展
    3 研究内容与技术路线
        3.1 筛选非繁殖季节不同营养水平下的哈萨克羊卵巢中的差异表达基因
        3.2 差异性表达miRNA-mRNA靶标关系验证
        3.3 细胞水平上靶标基因对绵羊繁殖调控作用的功能验证
第二章 试验研究
    试验一 生物信息学筛选哈萨克羊卵巢中差异表达的microRNAs-mRNA
        1 引言
        2 材料与方法
            2.1 试验材料
            2.2 试验方法
        3 试验结果
            3.1 差异表达miRNA-mRNA分析
            3.2 实时荧光定量验证
            3.3 靶基因预测
            3.4 差异miRNA靶基因富集分析
        4 讨论
        5 小结
    试验二 双荧光素酶报告系统鉴定oar-miR-200c介导MAPK8 基因的靶向调控
        1 引言
        2 材料与方法
            2.1 材料
            2.2 试验方法
        3 试验结果
            3.1 oar-miR-200c的靶基因
            3.2 野生型和突变型psiCHECKTM-2 载体构建与鉴定
            3.3 HEK-293T细胞培养转染
            3.4 oar-miR-200c对 MAPK8 表达的影响
        4 讨论
        5 小结
    试验三 绵羊卵巢颗粒细胞中miR-200c对 MAPK8 基因的表达调控
        1 引言
        2 材料与方法
            2.1 材料
            2.2 试验方法
        3 试验结果
            3.1 卵巢颗粒细胞的培养
            3.2 卵巢颗粒细胞的免疫组化染色
            3.3 miR-200c对MAPK8 等发情相关基因的影响
        4 讨论
        5 小结
    试验四 绵羊卵巢颗粒细胞中miR-200c介导MAPK8对E2、P4 的影响
        1 引言
        2 材料与方法
            2.1 材料
            2.2 试验方法
        3 试验结果
        4 讨论
        5 小结
第三章 全文结论
第四章 论文创新点
参考文献
致谢
作者简介
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表



本文编号：3731471