伪结核棒状杆菌pld和cp40基因的克

发布时间：2023-01-15 21:05

　　为了解伪结核棒状杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis,CP）陕西分离株的pld和cp40基因的遗传变异情况及制备检测抗原,利用GenBank收录CP的pld（CP001829.1）和cp40（KY041980.1）基因序列,设计合成特异性PCR引物,分别对pld和cp40基因进行扩增、序列分析和原核表达。结果表明,成功克隆了CP陕西分离株的pld和cp40全基因序列。核苷酸序列分析表明,陕西分离株pld基因与国内外已报道的伪结核棒状杆菌核苷酸同源性在98%～100%之间,cp40基因核苷酸同源性在91%～99%之间。pld和cp40基因重组原核表达菌株经IPTG诱导后可分别表达约为33 ku和41 ku的重组融合蛋白,重组蛋白均能与CP的阳性血清特异性结合。试验结果可为CP陕西分离株分子生物学特性研究提供资料,为进一步研制CP抗体ELISA检测试剂盒提供基础。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌种、质粒和阳性血清
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 引物设计与合成
        1.2.2 pld和cp40基因的扩增及原核表达载体的构建
        1.2.3 pld和cp40基因序列分析
        1.2.4 重组PLD和CP40蛋白的原核表达
        1.2.5 PLD和CP40蛋白的Western blot分析
2 结果
    2.1 PCR扩增结果
    2.2 原核重组质粒的酶切鉴定
    2.3 pld和cp40基因序列及进化树分析
    2.4 重组蛋白表达形式的分析
    2.5 重组PLD和CP40蛋白Western blot分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3731485