组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建

发布时间：2023-01-15 21:21

　　该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子,构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds,并以其为基础框架,分别导入粪肠球菌（Enterococcus faecalis）来源的8种信号肽（s1～s8）,采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27,构建组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重组粪肠球菌。以发酵上清液中α-淀粉酶活性为评价指标,对8种信号肽进行筛选,并对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy进行分离纯化和酶学性质研究。结果表明,信号肽s7对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,发酵上清液中α-淀粉酶活性达到310 U/m L。重组Gt-amy的最适反应pH值为5.0,在pH 4.0～8.0范围内具有较好的稳定性,最适反应温度为80℃,于80℃的半衰期为3 h,在40℃条件下反应3 h,对玉米淀粉的降解率可达55.8%。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 试剂
        1.1.3 培养基
    1.2 仪器与设备
    1.3 方法
        1.3.1 重组质粒p SIP401Z-gtamyhds的构建与鉴定
        1.3.2 信号肽筛选质粒的构建与鉴定
        1.3.3 重组粪肠球菌的构建
        1.3.4 重组粪肠球菌中嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的组成型分泌表达和纯化
        1.3.5 重组嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的酶学性质分析
        1.3.6 检测方法
        1.3.7 数据处理
2 结果与分析
    2.1 信号肽的筛选
    2.2 重组粪肠球菌中嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的纯化
    2.3 重组嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的酶学性质
        2.3.1 重组嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的最适作用p H值和p H稳定性
        2.3.2 重组嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的最适作用温度和热稳定性
        2.3.3 嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy对玉米淀粉的降解
3 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]植酸酶YiAPPA在粪肠球菌中的高效组成型表达研究[J]. 袁林,曾静,郭建军,魏国汶,陈俊,杨罡.  食品工业科技. 2020(09)
[2]饲用粪肠球菌EXW27培养条件的响应面优化[J]. 郭建军,熊大维,曾静,魏国汶,杜建华,袁林.  中国饲料. 2019(23)
[3]嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中结构域C的环化重排及其对Gt-amy催化性能的影响[J]. 曾静,郭建军,涂熠坤,魏国汶,袁林.  食品科学. 2019(20)
[4]乳酸菌用作口服疫苗表达载体的应用研究进展[J]. 亓秀晔,刘乃芝,程福亮,徐海燕,谷巍.  中国酿造. 2019(06)
[5]D407A/D430A双位点突变对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶GTamy酶学性质的影响[J]. 曾静,郭建军,袁林.  食品工业科技. 2018(14)



本文编号：3731499