犬UC-MSC-Exo来源miRNA表达分析及其cfa-miR-34a/-143对血管内皮细胞增殖的影响

发布时间：2023-01-25 17:02

　　试验旨在分离鉴定犬脐带间充质干细胞分泌的外泌体（UC-MSC-Exo）,并研究犬UC-MSC-Exo来源miRNA的表达情况及其对血管内皮细胞（VEC）增殖的影响。采用超高速离心法从犬脐带间充质干细胞培养上清中分离外泌体,采用Western blotting、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法（NTA）进行鉴定。通过对犬UC-MSC-Exo中的miRNA进行测序,筛选出2个目标miRNA（cfa-miR-34a和cfa-miR-143）并合成相应的mimic和inhibitor,转染犬VEC;采用荧光显微镜和实时荧光定量PCR法检测mimic和inhibitor转染情况及其转染效率;CCK-8法检测转染mimic和inhibitor对犬VEC增殖能力的影响,并对其靶基因进行预测。结果显示,犬UC-MSC-Exo表达特异性的外泌体表面蛋白CD9、CD63和CD81,粒径集中在100～200 nm,电镜检测成典型的杯状。免疫荧光结果表明,miRNA mimic和inhibitor均已转染进细胞内,并且聚集于细胞质中;实时荧光定量PCR结果表明,转染cfa-miR-34a mimic和cfa-mi... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 犬UC-MSC-Exo的分离
        1.2.2 犬UC-MSC-Exo的鉴定
        1.2.3 犬UC-MSC-Exo miRNA测序
        1.2.4 目标miRNA筛选
        1.2.5 VEC的分离培养
        1.2.6 荧光显微镜观察mimic和inhibitor转染情况
        1.2.7 实时荧光定量PCR法检测mimic和inhibitor转染效率
        1.2.8 CCK-8法检测细胞增殖情况
        1.2.9 cfa-miR-34a和cfa-miR-143靶基因预测
2 结 果
    2.1 外泌体的鉴定结果
    2.2 外泌体miRNA测序结果
    2.3 miRNAs转染效果检测
    2.4 miRNAs对VEC增殖影响
    2.5 cfa-miR-34a和cfa-miR-143靶基因预测
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]犬脐带间充质干细胞来源外泌体对血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡的调控作用[J]. 詹小舒,罗惠娜,罗冬章,陈胜锋,王丙云,白银山,陈志胜,刘璨颖,计慧琴.  中国组织工程研究. 2019(29)
[2]外泌体的功能及其在临床应用中的研究进展[J]. 杨金鑫,王海军,赵永坤,裴志花,孙明洁,王开,胡桂学.  中国畜牧兽医. 2018(12)
[3]犬脐带间充质干细胞来源外泌体修复皮肤创伤[J]. 詹小舒,罗冬章,王丙云,卢瑜,冼伟杭,蓝奕琦,郭建波,罗惠娜,白银山,计慧琴,陈胜锋,陈志胜,刘璨颖.  中国组织工程研究. 2018(25)
[4]骨髓间充质干细胞移植修复皮肤创伤[J]. 张贝莹,罗冬章,麦海涛,陈祥浪,郭彦,王丙云,陈胜锋,陈志胜.  中国组织工程研究. 2017(29)



本文编号：3731590