GABARAPL2在IFN-γ抑制弓形虫生长过程中的功能研究

发布时间：2023-01-25 23:03

　　干扰素-γ（IFN-γ）诱导的先天性免疫应答在抑制弓形虫感染中起着重要的作用。IFN-γ介导的小鼠体内弓形虫的清除需要免疫相关GTPases（IRGs）和鸟苷酸结合蛋白（GBPs）以及自噬蛋白等的参与。然而,在IFN-γ刺激的人类细胞中,这些效应器（如IRGs）不表达或功能不显著（如GBPs）。那么,这些人类细胞如何抑制弓形虫的生长?有报道称IFN-γ能够刺激HeLa细胞以非酸化依赖的方式抑制弓形虫的生长。另有研究发现泛素、自噬受体p62和NDP52以及LC3等均能够被招募至IFN-γ诱导的人细胞中弓形虫的PVs附近,并特异性抑制弓形虫的生长。也有研究表明,GABARAPL2而非LC3在IFN-γ诱导的小鼠清除弓形虫的过程中发挥重要功能。但是,人类细胞与小鼠细胞在IFN-γ刺激的抑制弓形虫感染的机制上存在差异。因此,验证HeLa细胞中GABARAPL2在抑制弓形虫感染中的作用至关重要。本研究首先采用CRISPR/Cas9技术获得了 GABARAPL2基因敲除的HeLa细胞系（GABARAPL2KO）,并通过免疫荧光检测发现经IFN-γ诱导的HeLa细胞中GABARAPL2能够被募集至弓... 

【文章页数】：67 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
    1.1 弓形虫及弓形虫病
    1.2 弓形虫感染与宿主免疫
    1.3 IFN-γ抗弓形虫感染免疫
        1.3.1 诱导吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)
        1.3.2 产生一氧化氮(NO)
        1.3.3 产生活性氧(ROS)
        1.3.4 IFN-γ诱导的免疫相关GTPase (IRGs)和鸟苷酸结合蛋白(GBPs)
        1.3.5 IFN-γ相关的非典型自噬
    1.4 研究目的及意义
第二章 研究报告
    2.1 材料和方法
        2.1.1 虫株、细胞和载体
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 弓形虫和细胞的体外培养
        2.1.5 RNA提取及反转录
        2.1.6 重组表达质粒的构建
        2.1.7 细胞基因敲除
        2.1.8 最佳药物使用浓度筛选
        2.1.9 过表达细胞系的构建
        2.1.10 Western blotting检测
        2.1.11 间接免疫荧光试验
        2.1.12 弓形虫细胞内复制试验
        2.1.13 数据统计学分析
    2.2 结果
        2.2.1 IFN-γ调节GABARAPL2募集于PVs
        2.2.2 GABARAPL2KO细胞系的构建
        2.2.3 GABARAPL2抑制弓形虫的生长
        2.2.4 IFN-γ及泛素调节GABARAPL2募集于弓形虫PVs
        2.2.5 IFN-γ调节多种自噬受体募集于弓形虫PV
        2.2.6 自噬受体p62、NDP52和OPTN敲除细胞系的构建
        2.2.7 自噬受体的缺失影响GABARAPL2向PVs的募集
        2.2.8 ATG5缺失细胞系的构建
        2.2.9 ATG5调节GABARAPL2向弓形虫PV的募集
        2.2.10 FIP200募集于弓形虫PVs
        2.2.11 IFN-γ调节下基因缺失细胞中PLK生长检测
        2.2.12 IFN-γ调节的抑制弓形虫感染模型
    2.3 讨论
第三章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3731896