Tβ4基因定点整合绒山羊的检测及该基因对绒毛生长促进作用的机制研究

发布时间：2023-01-30 20:48

　　羊绒是重要的高端纺织品原材料,随着世界范围内羊绒市场的日益扩大,对羊绒产量及质量的要求也日益提高。绒山羊作为我国优良的畜种,其羊绒品质优良,但多年来在绒山羊选育中为了提高羊绒产量盲目进行杂交,造成山羊平均产绒量和羊绒质量降低、传统良种和改良品种所占比例不高等问题。利用现代生物技术对绒山羊进行分子育种是今后绒山羊育种的重要方向。胸腺素β4具有多种生物学功能,其对毛发生长的促进作用已在很多研究中被证实,但作用机制还没有明确的定论。本研究在利用基因编辑技术获得Tβ4基因定点整合绒山羊的基础上,对Tβ4基因定点整合绒山羊进行鉴定及健康状况评价,观察Tβ4基因对绒山羊绒毛生长的影响,利用Tβ4基因定点整合绒山羊进行扩繁并对后代进行检测,进一步结合转录组学及蛋白组学分析探究Tβ4基因促进绒毛生长的机制,为今后利用基因编辑技术培育高产优质绒山羊提供理论依据。一、Tβ4基因定点整合绒山羊的检测1、Tβ4基因定点整合绒山羊的鉴定及健康状况评价本研究在利用CRISPR/Cas9结合体细胞核移植技术获得了Tβ4基因在CCR5位点定点整合绒山羊的基础上,对该基因编辑绒山羊进行了southern blot检测、... 

【文章页数】：136 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 Tβ4基因促进毛发生长的研究进展
    1.1 Tβ4的分子和生化特性
    1.2 Tβ4在细胞内的定位
    1.3 Tβ4的功能研究进展
        1.3.1 肌动蛋白结合蛋白
        1.3.2 角膜修复及抗炎
        1.3.3 加速皮肤伤口愈合
    1.4 Tβ4促进毛发生长的研究进展
        1.4.1 Tβ4通过激活毛囊干细胞促进毛发生长
        1.4.2 过表达Tβ4促进牙齿异常发育及促进毛发生长
        1.4.3 Tβ4 激活P38/ERK/AKT信号通路促进毛发生长
        1.4.4 Tβ4 激活Wnt/β-catenin/ Lef-1 信号通路
        1.4.5 Tβ4过表达增加绒山羊次级毛囊个数
    1.5 结语
第二章 Tβ4基因定点整合绒山羊的检测
    前言
    第一节 Tβ4基因定点整合绒山羊的鉴定及健康状况评价
        2.1 实验材料
            2.1.1 仪器设备
            2.1.2 试剂耗材
        2.2 实验方法
            2.2.1 Southern blot检测
            2.2.2 Real-time PCR检测
            2.2.3 免疫细胞化学检测
            2.2.4 脱靶分析
            2.2.5 基因位点检测
            2.2.6 生长状况监测
            2.2.7 血常规检测
        2.3 结果
            2.3.1 Southern blot检测
            2.3.2 Real-time PCR检测
            2.3.3 免疫细胞化学检测
            2.3.4 脱靶分析
            2.3.5 基因位点检测
            2.3.6 生长状况监测
            2.3.7 血常规检测
        2.4 讨论
    第二节 Tβ4基因定点整合绒山羊产绒性能的检测
        3.1 实验材料
            3.1.1 仪器设备
            3.1.2 试剂耗材
        3.2 实验方法
            3.2.1 石蜡切片及HE染色
            3.2.2 免疫组织化学
            3.2.3 绒样检测
        3.3 结果
            3.3.1 石蜡切片及HE染色
            3.3.2 免疫组织化学
            3.3.3 绒样检测
        3.4 讨论
    第三节 Tβ4基因定点整合绒山羊的扩繁及后代的检测
        4.1 实验材料
            4.1.1 仪器设备
            4.1.2 试剂耗材
        4.2 实验方法
            4.2.1 Tβ4基因定点整合绒山羊的超数排卵
            4.2.2 胚胎移植
            4.2.3 子一代PCR检测
            4.2.4 子一代Real-time PCR检测
            4.2.5 皮肤组织石蜡切片及HE染色
            4.2.6 免疫组化
            4.2.7 绒山羊各组织器官Tβ4 基因m RNA表达水平的检测
            4.2.8 血常规检测
        4.3 结果
            4.3.1 超数排卵
            4.3.2 胚胎移植
            4.3.3 子一代PCR检测
            4.3.4 子一代Real-time PCR检测
            4.3.5 石蜡切片及HE染色
            4.3.6 免疫组化
            4.3.7 绒山羊各组织器官Tβ4 基因m RNA表达水平的检测
            4.3.8 血常规检测
        4.4 讨论
第三章 Tβ4基因促进绒山羊绒毛生长的机制研究
    前言
    第一节 Tβ4基因定点整合绒山羊的转录组学分析
        5.1 实验材料
        5.2 实验方法
            5.2.1 绒山羊皮肤样本RNA的提取
            5.2.2 质控数据统计
            5.2.3 序列比对分析
            5.2.4 转录组质量评估
            5.2.5 转录本组装
            5.2.6 转录组功能注释
            5.2.7 表达量分析
            5.2.8 表达量差异统计
        5.3 结果
            5.3.1 绒山羊皮肤样本RNA的提取
            5.3.2 质控数据统计
            5.3.3 序列比对分析
            5.3.4 转录组质量评估
            5.3.5 转录本组装
            5.3.6 表达量差异统计
            5.3.7 差异表达基因的分析
            5.3.8 差异表达基因的验证
        5.4 讨论
    第二节 Tβ4基因定点整合绒山羊的蛋白组学分析及关联分析
        6.1 实验材料
            6.1.1 仪器设备
            6.1.2 试剂耗材
        6.2 实验方法
            6.2.1 皮肤组织总蛋白提取
            6.2.2 总蛋白质浓度测定
            6.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳
            6.2.4 还原烷基化和酶解
            6.2.5 iTRAQ标记
            6.2.6 高p HUPLC第一维分离
            6.2.7 液相串联质谱
            6.2.8 数据质控评估
            6.2.9 全蛋白功能注释
            6.2.10 差异蛋白分析
            6.2.11 蛋白组与转录组关联分析
            6.2.12 关联分析的验证
        6.3 结果
            6.3.1 蛋白浓度测定
            6.3.2 数据质控评估
            6.3.3 差异蛋白统计
            6.3.4 差异蛋白分析
            6.3.5 蛋白组与转录组关联分析
            6.3.6 关联分析的验证
        6.4 讨论
结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文及发明专利


【参考文献】：
期刊论文
[1]2018年度内蒙古自治区山羊绒、绵羊毛公证检验质量分析报告[J]. 王莉,邱瑞卿,吕晓红,邹俊.  中国纤检. 2019(02)
[2]转基因动物及其产品的主要管理制度[J]. 李晓琳,吴绍强,刘晓飞,王勤,景宏丽,仇松寅,林祥梅.  畜牧与兽医. 2019(02)
[3]2017年度内蒙古自治区山羊绒、绵羊毛公证检验质量分析报告[J]. 王莉,邱瑞卿,吕晓红,邹俊.  中国纤检. 2018(03)
[4]2016年度内蒙古自治区山羊绒、绵羊毛公证检验质量分析报告[J]. 王莉,邱瑞卿,吕晓红,邹俊.  中国纤检. 2017(04)
[5]sgRNAcas9软件图形用户界面开发及应用[J]. 赵长志,张懿,李广磊,陈济良,李京津,任瑞敏,倪攀,赵书红,谢胜松.  遗传. 2015(10)
[6]中国山羊绒品质分析(二)[J]. 田文亮.  中国纤检. 2015(03)
[7]加强绒山羊育种工作推动绒山羊产业由数量型向质量效益型转变[J]. 郑友民.  中国畜牧业. 2014(21)
[8]绒山羊育种中的绒毛品质检测方法[J]. 王红光.  湖北畜牧兽医. 2014(11)
[9]不同因素对奶牛超数排卵效果影响的研究[J]. 薛仰全,倪兴军,余四九.  中国草食动物科学. 2013(05)
[10]转录组研究新技术:RNA-Seq及其应用[J]. 祁云霞,刘永斌,荣威恒.  遗传. 2011(11)

博士论文
[1]基于蛋白组学与转录组学的奶牛子宫内膜炎补体机制研究[D]. 张世栋.中国农业科学院 2018
[2]家蚕基质金属蛋白酶家族MMPs及组织金属蛋白酶抑制剂TIMP在家蚕中的功能研究[D]. 刘太行.西南大学 2017
[3]大鼠佐剂性关节炎滑膜细胞G蛋白偶联信号通路与MAPK信号通路的关系及白芍总苷的作用[D]. 郑咏秋.安徽医科大学 2004

硕士论文
[1]优质和牛超数排卵和胚胎移植技术的研究与应用[D]. 隋鹤鸣.吉林大学 2018
[2]CRISPR/Cas9介导绒山羊Tβ4基因定点敲入的研究[D]. 李晓聪.内蒙古大学 2017
[3]不同能量水平日粮对内蒙古白绒山羊生殖激素、泌乳性能及初生羔羊发育状况的影响[D]. 李康.内蒙古农业大学 2016
[4]VEGF165通过MAPK信号通路调节uPA蛋白表达的实验研究[D]. 黄鹂.南昌大学医学院 2015
[5]蒙古阿尔巴斯白绒山羊毛囊发育过程中VEGF相关信号通路的研究[D]. 刘柳.内蒙古大学 2015



本文编号：3733435