梅迪-维斯纳病毒gag蛋白的原核表达及其交叉反应原性

发布时间：2023-02-08 17:07

　　为鉴定适用于中国小反刍动物慢病毒(Small ruminants lentivirus viruses,SRLVs)血清学诊断的通用蛋白标记物,本研究以梅迪-维斯纳病毒(Maedi-Visna virus,MVV)四川株为模板扩增获得gag基因序列,使用生物信息学方法分析其与中国山羊关节炎-脑炎病毒(Caprine arthritis encephalitis virus,CAEV)分离株gag蛋白氨基酸序列和抗原表位相似性,构建gag基因重组表达载体并转入BL21(DE3)宿主菌进行诱导表达,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting确定其大小、分布和反应原性。结果显示,MVV gag蛋白氨基酸序列与中国CAEV分离株的相似性为74.7%～74.9%,它的11个抗原表位与CAEV gag蛋白的12个抗原表位存在较高的序列相似性,推测其可作为中国SRLVs血清学诊断的通用蛋白质标记物;SDS-PAGE检测结果显示,重组gag蛋白大小约为55 000,主要以包涵体形式存在,Western blotting显示该蛋白可与MVV和CAEV感染...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 菌(毒)株与载体
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 引物设计与合成
    1.2 试验方法
        1.2.1 病毒基因组DNA的提取
        1.2.2 MVV gag基因的PCR扩增
        1.2.3 重组表达载体的构建
        1.2.4 MVV和CAEV gag蛋白的生物信息学分析
        1.2.5 重组gag蛋白的诱导表达及Western blotting分析
2 结果与分析
    2.1 MVV gag基因重组质粒的构建
    2.2 gag蛋白氨基酸序列与抗原表位分析
    2.3 MVV gag重组质粒的诱导表达与反应原性分析
3 讨 论



本文编号：3738060