猪繁殖与呼吸综合征病毒HBap4/2018株遗传变异分析及致病性评价

发布时间：2023-02-08 21:04

　　猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是近十多年来对我国生猪产业危害严重的动物疾病,其病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的传染性较强,可导致母猪繁殖障碍以及仔猪和育肥猪严重的呼吸系统疾病。在外界环境和免疫压力下容易发生变异,不同PRRSV变异株其基因组遗传特性和致病性也不尽相同,及时监测PRRSV分离株遗传变异特征,可为指导PRRSV科学防控策略的制定和有效疫苗的研制提供有益帮助。本研究中我们首先对566份发病猪临床样品进行了PRRSV检测,结果发现其中246份样品呈PRRSV阳性。选择其中部分阳性样品的Nsp9、Nsp2和ORF5基因进行序列分析。结果显示:在PRRSV阳性样品中,18株ORF5基因主要分布于L1、L3和L8三个谱系中;28株毒株Nsp2基因主要分布于L1、L5和L8三个谱系中;10株Nsp9基因分布于L1和L8两个谱系中。氨基酸序列分析结果显示,不同毒株间Nsp2基因存在4种...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第一章 绪论
    1.1 PRRSV概述
        1.1.1 PRRSV病原学
        1.1.2 PRRSV基因组结构
        1.1.3 PRRSV结构蛋白与功能
        1.1.4 PRRSV非结构蛋白与功能
        1.1.5 PRRSV遗传变异与重组机制
    1.2 我国PRRSV流行状况与防控
    1.3 研究目的与意义
第二章 2017–2019年我国部分地区PRRSV分子流行病学分析
    2.1 材料
        2.1.1 临床样品采集
        2.1.2 主要试剂与仪器
        2.1.3 引物
    2.2 方法
        2.2.1 病料处理
        2.2.2 病料的RNA提取
        2.2.3 病毒cDNA的合成
        2.2.4 样品检测
        2.2.5 目的基因片段扩增
        2.2.6 目的基因的PCR产物纯化
        2.2.7 目的基因与载体连接
        2.2.8 重组质粒的转化
        2.2.9 菌液PCR鉴定与测序
        2.2.10 遗传进化分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 样品检测结果
        2.3.2 PRRSV特异性片段的扩增结果
        2.3.3 Nsp2基因的遗传进化和同源性分析
        2.3.4 Nsp2氨基酸序列比对
        2.3.5 ORF5基因的遗传进化及同源性分析
        2.3.6 GP5氨基酸序列比对
        2.3.7 Nsp9基因的遗传进化分析及同源性分析
        2.3.8 Nsp9氨基酸序列比对分析
    2.4 讨论
第三章 HBap4/2018株的分离鉴定与遗传变异分析
    3.1 材料
        3.1.1 病料
        3.1.2 抗体、病毒和细胞
        3.1.3 主要试剂与仪器
        3.1.4 引物合成
    3.2 方法
        3.2.1 PRRSV毒株的分离
        3.2.2 RT-PCR鉴定
        3.2.3 间接免疫荧光鉴定
        3.2.4 噬斑形态观察
        3.2.5 病毒生长曲线绘制
        3.2.6 全长基因组扩增与克隆测序
        3.2.7 PRRSV分离株的遗传变异分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 病毒分离的CPE观察
        3.3.2 分离毒株的RT-PCR鉴定
        3.3.3 间接免疫荧光鉴定
        3.3.4 病毒生长特性分析
        3.3.5 病毒全长基因扩增
        3.3.6 分离毒株的全基因组遗传进化分析
        3.3.7 SHpd1/2018分离株的重组分析
        3.3.8 HBap4/2018分离株的重组分析
    3.4 讨论
第四章 PRRSV自然重组毒HBap4/2018 对仔猪的致病性评价
    4.1 实验材料及设备
        4.1.1 毒株与实验猪
        4.1.2 主要试剂与仪器
    4.2 方法
        4.2.1 实验动物筛选与分组
        4.2.2 实验猪攻毒
        4.2.3 临床症状观察
        4.2.4 样品采集及处理
        4.2.5 PRRSV抗体检测
        4.2.6 病毒载量检测
        4.2.7 血液中病毒滴度检测
        4.2.8 血液中病毒的分离与鉴定
        4.2.9 剖检及组织病理学观察
        4.2.10 统计学分析
    4.3 结果
        4.3.1 试验猪临床症状观察
        4.3.2 体温变化
        4.3.3 日增重变化
        4.3.4 试验猪存活率统计
        4.3.5 血清中PRRSV抗体检测
        4.3.6 鼻拭子排毒及病毒血症检测
        4.3.7 血液中病毒滴度检测
        4.3.8 血液中病毒的分离与鉴定
        4.3.9 剖检病理观察
        4.3.10 组织病理变化
    4.4 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3738369