家犬嗅觉受体基因的空间表达差异及进化分析

发布时间：2023-02-10 16:27

　　1991年，Linda和Richard首次在褐家鼠中发现了嗅觉受体（olfactory receptor）超基因家族，并因此获得了2004年的诺贝尔生理学奖。在近20多年的时间里，科学家们在其他动物中也发现了大量的OR基因并对嗅觉系统的反应机制做了详细的阐述。家犬在15000前由狼驯化而来，家犬因其敏锐的嗅觉被用于追寻猎物、寻找毒品爆炸物等众多领域。作为人类的伙伴，家犬的OR基因得到了大家的广泛研究。到目前为止，已发现1400多个家犬OR基因分为17个家族，其中Class I有4个家族，其余的13个家族都属于ClassⅡ。家犬的OR基因家族中假基因占OR基因总数的20%左右，与鼠类的假基因率相近，但远低于人类等嗅觉差的哺乳动物。科学家发现One-ONS，One-OR的表达模式是嗅觉受体细胞所特有的，并且发现OR基因在主要嗅觉粘膜（MOE）上呈带状分布。本实验对Family1不同亚家族的8个基因（cOR1A3、cOR1P2、cOR1X2、cOR1R4、OR1L6、OR1E1、OR1K1、OR1I1）进行了基因和氨基酸序列的分析并构建了它们与不同哺乳动物间的进化树，通过同源建模预测了氨基酸...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1.嗅觉的研究进展
    1.1 家犬的嗅觉及其生理结构特点
        1.1.1 家犬的嗅觉
        1.1.2 家犬嗅觉系统的结构
        1.1.3 嗅觉信号传导通路
    1.2 嗅觉受体
        1.2.1 嗅觉受体的发现及其结构特点
        1.2.2 嗅觉受体基因（OR）家族
        1.2.3 嗅觉受体假基因
    1.3 嗅觉受体（OR）基因表达
        1.3.1 嗅觉受体基因表达的分布
        1.3.2 嗅觉受体基因的时空表达
        1.3.3 嗅觉受体基因的异位表达
        1.3.4 嗅觉受体的气味识别
    1.4 嗅觉受体基因的进化分析
    1.5 双侧鼻腔的嗅觉差异
2.材料方法
    2.1 实验动物
    2.2 家犬 OR 基因的选取
    2.3 主要实验药品和试剂
    2.4 主要实验仪器
    2.5 实验方法
        2.5.1 嗅觉粘膜总 RNA 的提取
        2.5.2 RNA 的检测
        2.5.3 RNA 的纯化
        2.5.4 cDNA 第一条链的合成
        2.5.5 引物设计及合成
        2.5.6 8个OR基因目的序列的克隆
        2.5.7 家犬OR基因的相对定量表达
3.实验结果与分析
    3.1 组织样品总 RNA 提取结果电泳图
    3.2 目的条带的 RT-PCR 结果
    3.3 家犬 OR 基因序列测定结果及序列分析
    3.4 实时荧光定量 PCR 的结果分析
        3.4.1 实时荧光定量 PCR 的溶解曲线和标准曲线
        3.4.2 相对定量的结果与分析
4.讨论
    4.1 OR 的基因序列分析
    4.2 OR 的氨基酸序列分析
    4.3 OR 基因的进化分析
    4.4 8 个 OR 基因表达的相对定量分析
        4.4.1 OR 基因在 MOE 不同部位的表达差异
        4.4.2 OR 基因在个体间的表达差异
        4.4.3 家犬 8 个 OR 基因的相关性
5.结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
附录



本文编号：3739511