猪圆环病毒2型感染PK-15细胞中外泌体的鉴定及其对细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2023-02-12 20:01

　　旨在分离感染PCV2的PK-15细胞分泌的外泌体,探讨其在PCV2感染淋巴细胞中的作用。提取PCV2感染PK-15细胞上清液中的外泌体,利用透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析测定外泌体粒径、Western blot检测外泌体标记蛋白分子(CD81、TSG101);PKH67标记外泌体后检测细胞对外泌体的摄取;提取PCV2-外泌体基因组,检测PCV2 Rep和Cap基因;利用间接免疫荧光试验检测PCV2-外泌体感染PK-15细胞后PCV2病毒定位;通过绝对定量PCR检测PCV2-外泌体对淋巴细胞的感染率;利用CCK-8法检测淋巴细胞增殖;利用Annexin V-FITC/PI检测淋巴细胞凋亡率。透射电镜和外泌体粒径分析结果显示,PK-15细胞分泌的外泌体为双层膜的囊泡,直径30～200 nm;Western blot结果显示PK-15细胞分泌的外泌体存在特异性标记蛋白CD81和TSG101;外泌体摄取试验结果显示PCV2-外泌体能够被细胞摄取;PCR结果表明PCV2-外泌体基因组中含有PCV2 Rep和Cap基因;间接免疫荧光结果显示,与PCV2直接感染相比,PCV2-外泌体感染的...

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞和病毒及主要试剂材料
    1.2 外泌体的提取
    1.3 透射电镜观察
    1.4 Western blot
    1.5 PCR
    1.6 外泌体摄取试验
    1.7 间接免疫荧光
    1.8 猪脾淋巴细胞分离
    1.9 绝对定量PCR
    1.10 猪脾淋巴细胞增殖活性试验
    1.11 猪脾淋巴细胞凋亡试验
    1.12 数据统计
2 结 果
    2.1 PK-15细胞分泌外泌体特征
    2.2 外泌体摄取试验
    2.3 外泌体中PCV2基因组DNA检测
    2.4 外泌体PCV2感染PK-15细胞
    2.5 外泌体介导PCV2感染淋巴细胞
    2.6 PCV2-外泌体对猪脾淋巴细胞增殖的影响
    2.7 PCV2-外泌体对猪脾淋巴细胞凋亡的影响
3 讨 论
4 结 论



本文编号：3741736