不同毛色山羊内脏器官Agouti基因mRNA及其编码蛋白差异表达研究
发布时间：2023-02-15 08:08
Agouti基因除了对黑色素的形成具有调控作用外，其与机体的能量代谢调控也密切相关。山羊是重要的农业经济动物，研究和探讨不同毛色山羊不同内脏器官Agouti基因mRNA及其编码蛋白的差异表达特征，可以为进行转录调控等基因上游水平研究和对其表观遗传学及蛋白质组学深入探索提供理论基础，同时在山羊分子遗传育种方面也具有重要意义。 本研究利用实时荧光定量PCR技术（RT-qPCR）验证了白色、棕色和黑色三种毛色山羊不同内脏器官（心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏）中Agouti基因mRNA表达水平的差异。试验采用2-△△Ct方法分别从不同毛色山羊相同内脏器官、相同毛色山羊不同内脏器官Agouti基因mRNA表达量和山羊不同内脏器官Agouti基因mRNA总相对表达量三个水平进行了检测。在以白色山羊为对照的不同毛色山羊相同内脏器官角度进行比较时，白色山羊五个内脏Agouti基因mRNA表达量均最高，其次是棕色山羊，黑色山羊表达量最低，且白色山羊和黑色山羊表达量差异极显著（P<0.01），这一特征突出表现在肝脏。在以肺脏为对照的相同毛色山羊不同内脏器官角度作对比时，白色和棕色山羊的五个内脏中，肝脏...
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 AGOUTI 的涵义
1.2 AGOUTI 基因研究现状
1.2.1 AGOUTI 信号蛋白与 AGOUTI 基因一因多效
1.2.2 AGOUTI 基因作用机理
1.2.3 AGOUTI 基因的研究现状
1.2.4 本课题组对山羊 AGOUTI 基因研究进展
1.3 本研究的目的、意义及主要内容
1.3.1 研究的目的和意义
1.3.2 研究的主要内容
2 材料与方法
2.1 主要试验材料及设备
2.1.1 样本采集
2.1.2 主要试剂和药品
2.1.2.1 荧光定量 PCR (RT‐QRCR)所用药品及试剂
2.1.2.2 WESTERN BLOTTING 所用药品及试剂
2.1.3 主要试验仪器与设备
2.1.3.1 RT‐qRCR所使用的主要试验仪器与设备
2.1.3.2 Western blotting所用主要试验仪器与设备
2.1.4 主要试剂的配制
2.1.4.1 RT‐qRCR主要试剂的配制
2.1.4.2 Western blotting主要试剂的配制
2.1.5 结果分析软件
2.1.5.1 RT‐qPCR试验主要分析软件
2.1.5.2 Western blotting 试验主要分析软件
2.2 试验方法和步骤
2.2.1 山羊内脏器官总 RNA 提取、纯化、检测和反转录
2.2.2 实时荧光定量 PCR（RT-QPCR）试验
2.2.3 山羊内脏器官总蛋白的提取与检测
2.2.4 蛋白免疫印迹（WESTERN BLOTTING）试验
3 结果与分析
3.1 不同毛色山羊不同内脏器官 AGOUTI 基因 MRNA 差异表达研究
3.1.1 不同毛色山羊内脏器官总 RNA 提取
3.1.2 反转录产物保真性检测结果及最佳 PCR 反应条件建立
3.1.3 切胶回收纯化 PCR 扩增产物和重组子构建结果
3.1.4 标准品质粒的提取
3.1.5 标准曲线建立结果
3.1.6 扩增曲线建立结果
3.1.7 熔解曲线的建立及样本 RT-QPCR 检测结果
3.1.8 样本 MRNA 相对表达量比较分析
3.2 不同毛色山羊不同内脏器官 AGOUTI 信号蛋白（ASIP）差异表达研究
3.2.1 山羊内脏器官总蛋白的提取
3.2.2 蛋白浓度的测定
3.2.3 免疫反应抗体浓度的优化
3.2.4 印迹膜化学发光检测结果
4 讨论
4.1 山羊脏器组织块的处理
4.2 总 RNA 的提取
4.3 PCR 扩增反应
4.4 不同毛色山羊不同内脏器官 AGOUTI 基因 MRNA 差异表达
4.5 总蛋白的提取与含量测定
4.6 WESTERN BLOTTING 试验与不同毛色山羊不同内脏器官 ASIP 蛋白差异表达
5 结论
参考文献
在读期间发表的论文
作者简介
致谢
本文编号：3743135
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
1 引言
1.1 AGOUTI 的涵义
1.2 AGOUTI 基因研究现状
1.2.1 AGOUTI 信号蛋白与 AGOUTI 基因一因多效
1.2.2 AGOUTI 基因作用机理
1.2.3 AGOUTI 基因的研究现状
1.2.4 本课题组对山羊 AGOUTI 基因研究进展
1.3 本研究的目的、意义及主要内容
1.3.1 研究的目的和意义
1.3.2 研究的主要内容
2 材料与方法
2.1 主要试验材料及设备
2.1.1 样本采集
2.1.2 主要试剂和药品
2.1.2.1 荧光定量 PCR (RT‐QRCR)所用药品及试剂
2.1.2.2 WESTERN BLOTTING 所用药品及试剂
2.1.3 主要试验仪器与设备
2.1.3.1 RT‐qRCR所使用的主要试验仪器与设备
2.1.3.2 Western blotting所用主要试验仪器与设备
2.1.4 主要试剂的配制
2.1.4.1 RT‐qRCR主要试剂的配制
2.1.4.2 Western blotting主要试剂的配制
2.1.5 结果分析软件
2.1.5.1 RT‐qPCR试验主要分析软件
2.1.5.2 Western blotting 试验主要分析软件
2.2 试验方法和步骤
2.2.1 山羊内脏器官总 RNA 提取、纯化、检测和反转录
2.2.2 实时荧光定量 PCR（RT-QPCR）试验
2.2.3 山羊内脏器官总蛋白的提取与检测
2.2.4 蛋白免疫印迹（WESTERN BLOTTING）试验
3 结果与分析
3.1 不同毛色山羊不同内脏器官 AGOUTI 基因 MRNA 差异表达研究
3.1.1 不同毛色山羊内脏器官总 RNA 提取
3.1.2 反转录产物保真性检测结果及最佳 PCR 反应条件建立
3.1.3 切胶回收纯化 PCR 扩增产物和重组子构建结果
3.1.4 标准品质粒的提取
3.1.5 标准曲线建立结果
3.1.6 扩增曲线建立结果
3.1.7 熔解曲线的建立及样本 RT-QPCR 检测结果
3.1.8 样本 MRNA 相对表达量比较分析
3.2 不同毛色山羊不同内脏器官 AGOUTI 信号蛋白（ASIP）差异表达研究
3.2.1 山羊内脏器官总蛋白的提取
3.2.2 蛋白浓度的测定
3.2.3 免疫反应抗体浓度的优化
3.2.4 印迹膜化学发光检测结果
4 讨论
4.1 山羊脏器组织块的处理
4.2 总 RNA 的提取
4.3 PCR 扩增反应
4.4 不同毛色山羊不同内脏器官 AGOUTI 基因 MRNA 差异表达
4.5 总蛋白的提取与含量测定
4.6 WESTERN BLOTTING 试验与不同毛色山羊不同内脏器官 ASIP 蛋白差异表达
5 结论
参考文献
在读期间发表的论文
作者简介
致谢
本文编号：3743135
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