约氏乳酸杆菌对猪单核源树突状细胞免疫功能的影响
发布时间：2023-02-15 18:08
树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是一种具有强大抗原提呈功能的免疫细胞,可促进T细胞和B细胞增殖分化,能够启动适应性免疫应答,具有调节炎症性免疫反应和免疫耐受的作用。DCs可以通过与肠道中的益生菌如乳酸杆菌作用调节机体黏膜免疫反应。约氏乳酸杆菌(Lactobacillus johnsonii,L.johnsonii)作为肠道中的益生菌能够调节宿主免疫反应,在维持宿主肠道内环境稳态、调节肠道内共生菌群的平衡和保持机体健康方面发挥着重要作用。分离于仔猪体内的约氏乳酸杆菌常被用于饲料添加剂,具有维持肠道菌群平衡,刺激黏膜免疫系统发育,促进营养吸收提高造血功能的益生作用;由于其安全性和可靠性,还可作为口服疫苗中递送抗原的理想传送载体。因此研究约氏乳酸杆菌对树突状细胞免疫功能的影响,对揭示乳酸菌对肠道黏膜免疫激活作用的机制具有重要意义。本实验通过采集5-8周龄仔猪外周血,利用Histopaque-1077淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs),再加入猪CD172a-PE单克隆抗体对单核细胞进行标记...
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 树突状细胞
1.1.1 树突状细胞的分类与分布
1.1.2 树突状细胞与肠道黏膜免疫系统
1.2 乳酸杆菌
1.2.1 乳酸杆菌的益生作用
1.2.2 乳酸杆菌的免疫调节作用
1.3 乳酸杆菌对树突状细胞的影响
1.4 乳酸杆菌作为重组疫苗载体研究进展
1.5 约氏乳酸杆菌研究进展
1.6 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌种
2.1.2 细胞
2.1.3 实验动物
2.1.4 培养基及主要试剂
2.1.5 引物
2.1.6 主要溶液配制
2.1.7 主要仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 猪外周血单核源树突状细胞(MoDCs)的分离培养
2.2.2 约氏乳酸杆菌生物学特性分析
2.2.3 约氏乳酸杆菌的培养及其灭活菌体和上清液制备
2.2.4 表达ps420 蛋白的重组约氏乳酸杆菌的构建及表达鉴定
2.2.5 表达ps420 蛋白的重组大肠杆菌构建,表达鉴定及蛋白纯化
2.2.6 约氏乳酸杆菌对猪树突状细胞免疫功能的影响
2.3 统计学分析
3 结果
3.1 树突状细胞的形态学观察
3.2 树突状细胞纯度检测
3.3 约氏乳酸杆菌生物学特性测定结果
3.3.1 生长曲线
3.3.2 约氏乳酸杆菌体外黏附性实验结果
3.3.3 约氏乳酸杆菌上清液抑菌实验结果
3.3.4 约氏乳酸杆菌药敏实验
3.4 表达ps420 蛋白的重组约氏乳酸杆菌的构建及表达鉴定结果
3.4.1 表达ps420 蛋白的重组约氏乳酸杆菌的PCR鉴定
3.4.2 Western blot鉴定重组约氏乳酸杆菌表达ps420 蛋白
3.5 表达ps420 蛋白的重组大肠杆菌构建及鉴定
3.5.1 重组大肠杆菌表达载体pET-28a-ps420 的鉴定
3.6 重组大肠杆菌表达ps420 蛋白的鉴定及蛋白纯化
3.6.1 SDS-PAGE鉴定
3.6.2 目的蛋白纯化及Western blot鉴定
3.7 约氏乳酸杆菌对猪单核源树突状细胞免疫功能的影响
3.7.1 树突状细胞表面标志检测
3.7.2 约氏乳酸杆菌对树突状细胞的黏附作用
3.7.3 qRT-PCR检测Toll样受体分子mRNA表达
3.7.4 细胞因子检测
3.7.5 CD4+T 细胞分离与纯度检测
3.7.6 CD4+T 细胞增殖及相关细胞因子检测
4 讨论
4.1 猪源约氏乳酸杆菌的益生作用
4.2 猪单核源树突状细胞的分离及诱导培养
4.3 约氏乳酸杆菌对MoDCs免疫功能的影响
4.4 表达ps420 蛋白重组约氏乳酸杆菌对MoDCs免疫功能的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3743577
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
1.1 树突状细胞
1.1.1 树突状细胞的分类与分布
1.1.2 树突状细胞与肠道黏膜免疫系统
1.2 乳酸杆菌
1.2.1 乳酸杆菌的益生作用
1.2.2 乳酸杆菌的免疫调节作用
1.3 乳酸杆菌对树突状细胞的影响
1.4 乳酸杆菌作为重组疫苗载体研究进展
1.5 约氏乳酸杆菌研究进展
1.6 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌种
2.1.2 细胞
2.1.3 实验动物
2.1.4 培养基及主要试剂
2.1.5 引物
2.1.6 主要溶液配制
2.1.7 主要仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 猪外周血单核源树突状细胞(MoDCs)的分离培养
2.2.2 约氏乳酸杆菌生物学特性分析
2.2.3 约氏乳酸杆菌的培养及其灭活菌体和上清液制备
2.2.4 表达ps420 蛋白的重组约氏乳酸杆菌的构建及表达鉴定
2.2.5 表达ps420 蛋白的重组大肠杆菌构建,表达鉴定及蛋白纯化
2.2.6 约氏乳酸杆菌对猪树突状细胞免疫功能的影响
2.3 统计学分析
3 结果
3.1 树突状细胞的形态学观察
3.2 树突状细胞纯度检测
3.3 约氏乳酸杆菌生物学特性测定结果
3.3.1 生长曲线
3.3.2 约氏乳酸杆菌体外黏附性实验结果
3.3.3 约氏乳酸杆菌上清液抑菌实验结果
3.3.4 约氏乳酸杆菌药敏实验
3.4 表达ps420 蛋白的重组约氏乳酸杆菌的构建及表达鉴定结果
3.4.1 表达ps420 蛋白的重组约氏乳酸杆菌的PCR鉴定
3.4.2 Western blot鉴定重组约氏乳酸杆菌表达ps420 蛋白
3.5 表达ps420 蛋白的重组大肠杆菌构建及鉴定
3.5.1 重组大肠杆菌表达载体pET-28a-ps420 的鉴定
3.6 重组大肠杆菌表达ps420 蛋白的鉴定及蛋白纯化
3.6.1 SDS-PAGE鉴定
3.6.2 目的蛋白纯化及Western blot鉴定
3.7 约氏乳酸杆菌对猪单核源树突状细胞免疫功能的影响
3.7.1 树突状细胞表面标志检测
3.7.2 约氏乳酸杆菌对树突状细胞的黏附作用
3.7.3 qRT-PCR检测Toll样受体分子mRNA表达
3.7.4 细胞因子检测
3.7.5 CD4+T 细胞分离与纯度检测
3.7.6 CD4+T 细胞增殖及相关细胞因子检测
4 讨论
4.1 猪源约氏乳酸杆菌的益生作用
4.2 猪单核源树突状细胞的分离及诱导培养
4.3 约氏乳酸杆菌对MoDCs免疫功能的影响
4.4 表达ps420 蛋白重组约氏乳酸杆菌对MoDCs免疫功能的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
本文编号：3743577
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3743577.html
