转人血清白蛋白延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚胎生产体系的优化
发布时间：2023-02-23 17:49
人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是迄今为止产量最大、用量最大的蛋白质药物。可是现在的生产方式主要是人的血液通过分级过滤获得,产量有限,而且因为血浆来源复杂,容易导致污染。因此,通过转基因技术构建乳腺表达载体,利用体细胞克隆技术得到分泌含人血清白蛋白乳汁的转基因克隆动物,并从动物乳汁中提取人血清白蛋白,是解决人血清白蛋白供应短缺的有效方法。乳腺生物反应器生产人血清白蛋白具有生产成本低、产品产量高、活性高、易于纯化等优点。制约转基因乳腺生物反应制药的主要因素是体细胞核移植技术效率低下。因此,本研究以延边奶山羊和本地绵羊为研究对象,对卵母细胞体外成熟、延边奶山羊-绵羊重构胚胎的构建及体外发育进行了研究,以期提高核移植效率,为以后得到表达人血清白蛋白的转基因延边奶山羊奠定坚实的基础。 本研究共分为三个部分,第一部分进行了不同核成熟抑制剂及抗氧化剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响的研究；第二部分进行了转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚的构建研究；第三部分是表没食子儿茶素没食子酸酯(Epi-gallocatechin-3-gallate, EGCG)对转人血清白蛋白延...
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
前言
第一章 不同核成熟抑制剂及抗氧化剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验方案
2 结果与分析
2.1 不同核成熟抑制剂对卵母细胞成熟的影响
2.2 不同抗氧化剂对卵母细胞成熟的影响
3 讨论
3.1 不同核成熟抑制剂对卵母细胞成熟的影响
3.2 不同抗氧化剂对卵母细胞成熟的影响
4 小结
参考文献
第二章 转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚的构建
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验方案
1.4 统计分析
2 结果与分析
2.1 不同去核法对核移植效率的影响
2.2 不同电融合方式对核植效率的影响
2.3 不同激活方法对重构胚体外发育率的影响
3 讨论
3.1 不同去核法对核移植效率的影响
3.2 不同电融合方式对核植效率的影响
3.3 不同激活方法对重构胚体外发育率的影响
4 小结
参考文献
第三章 EGCG对转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚体外发育质量的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验方案
2 结果与分析
2.1 不同浓度EGCG对囊胚率及囊胚细胞数的影响
2.2 不同浓度EGCG对重构胚囊胚内GSH和ROS水平的影响
2.3 不同时间添加EGCG对囊胚细胞凋亡的影响
3 讨论
4 小结
参考文献
结论
第四章 哺乳动物体细胞核移植研究进展
1 供体细胞的选择和培养
1.1 供体细胞的选择
1.2 供体细胞的培养
2 受体细胞的选择与去核
2.1 受体细胞的选择
2.2 受体细胞去核
3 细胞核的移植
3.1 带下注射
3.2 胞质内注射
3.3 全细胞胞质内注射
4 重构胚的融合与激活
4.1 重构胚的融合
4.2 重构胚的激活
5 重构胚的培养与移植
5.1 重构胚的培养
5.2 重构胚的移植
6 异种体细胞核移植的研究进展
6.1 异种核移植技术的研究历史
6.2 影响异种核移植技术的因素
参考文献
第五章 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展
1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究概况
2 哺乳动物卵母细胞成熟及调控机制
2.1 哺乳动物卵母细胞成熟
2.2 哺乳动物卵母细胞体外成熟培养形态学变化
2.3 哺乳动物卵母细胞成熟过程中的分子调控机理
3 卵母细胞体外成熟培养的影响因素
3.1 卵母细胞来源
3.2 培养系统
3.3 激素和生长因子
4 蛋白添加物
4.1 血清
4.2 卵泡液
参考文献
附录
攻读学位期间发表的论文
致谢
本文编号：3748459
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
前言
第一章 不同核成熟抑制剂及抗氧化剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验方案
2 结果与分析
2.1 不同核成熟抑制剂对卵母细胞成熟的影响
2.2 不同抗氧化剂对卵母细胞成熟的影响
3 讨论
3.1 不同核成熟抑制剂对卵母细胞成熟的影响
3.2 不同抗氧化剂对卵母细胞成熟的影响
4 小结
参考文献
第二章 转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚的构建
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验方案
1.4 统计分析
2 结果与分析
2.1 不同去核法对核移植效率的影响
2.2 不同电融合方式对核植效率的影响
2.3 不同激活方法对重构胚体外发育率的影响
3 讨论
3.1 不同去核法对核移植效率的影响
3.2 不同电融合方式对核植效率的影响
3.3 不同激活方法对重构胚体外发育率的影响
4 小结
参考文献
第三章 EGCG对转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚体外发育质量的影响
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.2 试验方法
1.3 试验方案
2 结果与分析
2.1 不同浓度EGCG对囊胚率及囊胚细胞数的影响
2.2 不同浓度EGCG对重构胚囊胚内GSH和ROS水平的影响
2.3 不同时间添加EGCG对囊胚细胞凋亡的影响
3 讨论
4 小结
参考文献
结论
第四章 哺乳动物体细胞核移植研究进展
1 供体细胞的选择和培养
1.1 供体细胞的选择
1.2 供体细胞的培养
2 受体细胞的选择与去核
2.1 受体细胞的选择
2.2 受体细胞去核
3 细胞核的移植
3.1 带下注射
3.2 胞质内注射
3.3 全细胞胞质内注射
4 重构胚的融合与激活
4.1 重构胚的融合
4.2 重构胚的激活
5 重构胚的培养与移植
5.1 重构胚的培养
5.2 重构胚的移植
6 异种体细胞核移植的研究进展
6.1 异种核移植技术的研究历史
6.2 影响异种核移植技术的因素
参考文献
第五章 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究进展
1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的研究概况
2 哺乳动物卵母细胞成熟及调控机制
2.1 哺乳动物卵母细胞成熟
2.2 哺乳动物卵母细胞体外成熟培养形态学变化
2.3 哺乳动物卵母细胞成熟过程中的分子调控机理
3 卵母细胞体外成熟培养的影响因素
3.1 卵母细胞来源
3.2 培养系统
3.3 激素和生长因子
4 蛋白添加物
4.1 血清
4.2 卵泡液
参考文献
附录
攻读学位期间发表的论文
致谢
本文编号：3748459
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3748459.html
