猪链球菌抗氧化应激蛋白YED和AHH的鉴定

发布时间：2023-02-26 09:08

　　为揭示猪链球菌抗氧化应激的机制,采用比较蛋白组学方法,鉴定猪链球菌抗氧化应激相关蛋白。提取猪链球菌全菌蛋白,以THB培养基培养的细菌作为对照,经H₂O₂处理后,液相色谱-串联质谱共鉴定出54个差异表达蛋白,其中28个蛋白在H₂O₂处理组中上调表达,26个蛋白下调表达。这些差异表达的蛋白主要参与代谢、生物合成、抗应激等过程。深入分析,发现7个新的蛋白可能参与猪链球菌抗氧化应激;从中选择在H₂O₂处理组显著上调表达的2个蛋白YbaB/EbfC家族核苷相关蛋白(YED)和2-氨基-4-羟基-6-羟甲基二氢蝶啶二磷酸激酶(AHH)进行验证。分别构建二者缺失株ΔYED和ΔAHH;生长曲线分析表明,2个缺失株在THB培养基中生长与野生株相似;氧化应激试验表明,经H₂O₂作用后,野生株存活率为97.12%,而ΔYED与ΔAHH则显著降低,分别为72.69%(P<0.05)和79.49%(P<0.05);小鼠巨噬细胞...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
    1.2 菌株、细胞和培养条件
    1.3 全菌蛋白提取及LC-MS/MS分析
    1.4 YED、AHH缺失株的构建
        1.4.1 Spc耐受正向筛选
        1.4.2 sacB反向筛选
    1.5 P1/7、ΔYED和ΔAHH菌株生长曲线的测定
    1.6 抗氧化应激试验
    1.7 RAW264.7吞噬与存活试验
    1.8 统计分析
2 结果
    2.1 LC-MS/MS比较蛋白组学分析
    2.2 YED、AHH对猪链球菌生长特性的影响
    2.3 YED、AHH对猪链球菌抗氧化应激能力的影响
    2.4 RAW264.7吞噬与存活试验
3 讨论



本文编号：3750247