羊口疮病毒间接免疫荧光检测方法的建立

发布时间：2023-02-26 18:07

　　为建立检测细胞培养物和组织切片中羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)的间接免疫荧光(IFA)方法,用已知滴度的ORFV感染牛睾丸上皮细胞,羊口疮病毒单克隆抗体(anti-ORFV mAb)为一抗,荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立细胞培养物ORFV的IFA检测方法,并制备ORFV感染的山羊唇部组织冰冻切片,对组织中病毒进行检测。结果显示,用牛睾丸上皮细胞增殖的羊口疮病毒TCID₅₀达到10^-6.29/0.1 mL,ORFV适宜的接种滴度和培养条件为10^3.70 TCID₅₀ ORFV接种细胞,37℃、体积分数为5%的CO₂恒温箱培养42 h,荧光素标记羊抗小鼠二抗适宜工作浓度为1∶400稀释,此时羊口疮病毒单抗应用于IFA检测的特异性和灵敏度最佳,且可应用于病料组织中ORFV的定位检测。表明成功建立了羊口疮病毒单抗检测牛睾丸上皮细胞和组织切片中ORFV的间接免疫荧光方法,有助于ORFV感染的实验室诊断及其在感染细胞中的定位和动态分布研究。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒、细胞株和组织
        1.1.2 主要试剂与仪器
    1.2 方法
        1.2.1 细胞中ORFV的间接免疫荧光检测
            1.2.1.1 牛睾丸上皮细胞的传代培养
            1.2.1.2 羊口疮病毒TCID50测定
            1.2.1.3 间接免疫荧光试验
            1.2.1.4 ORFV接种滴度的确定
            1.2.1.5 荧光素标记羊抗小鼠二抗工作浓度的确定
        1.2.2 组织中ORFV的间接免疫荧光检测
            1.2.2.1 组织冰冻切片制备
            1.2.2.2 免疫荧光染色
2 结果
    2.1 羊口疮病毒TCID50测定
    2.2 ORFV接种滴度的优化结果
    2.3 荧光素标记羊抗小鼠二抗工作浓度确定
    2.4 组织中ORFV的间接免疫荧光检测
3 讨论



本文编号：3750643