胰岛素通过mTOR信号通路对鹅肝细胞体外增殖的调控研究

发布时间：2023-03-01 17:19

　　mTOR (the mammalian target of rapamycin)是一种Ser/Thr蛋白激酶,其存在于哺乳动物细胞中,并可以通过汇聚和整合细胞内外的信号(生长因子、营养、能量等)进而调控细胞的生长增殖。mTOR信号通路可以影响胚胎干细胞以及早期胚胎的发育,并且与代谢紊乱以及肿瘤等疾病有关,胰岛素可起到正向调控作用。本课题选择鹅肝细胞为样本,在正常鹅原代肝细胞和mTOR信号通路被雷帕霉素(rapamycin)抑制的肝细胞中加入不同浓度的胰岛素(0、50、100、150nmol/L)处理,检测与细胞生长增殖相关的指标,探讨胰岛素对mTOR信号通路的调控机理。主要研究结果如下：1 用胰岛素处理时,鹅肝细胞的DNA合成速率和细胞活性均随着胰岛素浓度的升高表现出上升趋势,而且150nmol/L胰岛素组的Brdu阳性细胞的数量比对照组增加了60%。同时,三种D型细胞周期蛋白(Cyclin D1, Cyclin D2, Cyclin D3)的mRNA表达量都随着胰岛素浓度的增加而逐渐升高(P<0.05),而细胞周期负调控因子P21和P27的mRNA表达量均受到抑制。与对照组相比...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
主要符号说明
前言
1. 文献综述
    1.1 mTOR信号通路的功能
        1.1.1 mTOR信号通路与凋亡
        1.1.2 mTOR信号通路与肿瘤
        1.1.3 mTOR信号通路与细胞生长增殖
    1.2 D型细胞周期蛋白与细胞周期
        1.2.1 Cylcin D的功能
        1.2.2 D型细胞周期蛋白与肿瘤
        1.2.3 CIP/KIP家族蛋白
    1.3 胰岛素通过mTOR信号通路对细胞增殖的调控研究进展
        1.3.1 胰岛素对细胞增殖的调控研究
        1.3.2 胰岛素通过mTOR信号通路对细胞增殖的调控研究
    1.4 本实验目的意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂盒
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 胰岛素培养肝细胞
        2.2.3 蛋白活性测定
        2.2.4 MTT比色法测细胞活性
        2.2.5 基因表达检测
        2.2.6 Brdu-ELISA法检测DNA含量
        2.2.7 Brdu细胞免疫染色检测细胞增殖率
        2.2.8 Western Blot检测蛋白表达
3 数据处理
4 结果与分析
    4.1 胰岛素对鹅肝细胞的影响
    4.2 胰岛素对mTOR信号通路相关基因及蛋白浓度的影响
    4.3 雷帕霉素对鹅肝细胞增殖的影响
    4.4 雷帕霉素对mTOR信号通路相关基因及蛋白浓度的影响
    4.5 胰岛素和雷帕霉素共同对鹅肝细胞增殖的影响
    4.6. 胰岛素和雷帕霉素共同对mTOR信号通路相关基因及蛋白浓度的影响
5 讨论
    5.1 胰岛素在鹅肝细胞生长增殖中的调控作用
    5.2 雷帕霉素通过mTOR信号通路调控鹅肝细胞的生长增殖
    5.3 胰岛素通过mTOR信号通路调控鹅肝细胞增殖
6 结论
参考文献
致谢



本文编号：3751918