犬源干扰素刺激基因ISG15和IFIT2荧光定量PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2023-03-03 19:12

　　干扰素刺激基因在抗病毒及调节IFN信号通路的过程中具有重要作用。本课题组前期对犬瘟热病毒(CDV)感染宿主前后全转录组进行测序分析,发现干扰素刺激基因ISG15和IFIT2明显上调,为了进一步探究ISG15和IFIT2对CDV感染的影响,本研究设计合成了犬源ISG15、IFIT2和持家基因GAPDH的特异性引物,分别进行PCR扩增,构建质粒标准品,建立荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验。结果表明,犬源ISG15、IFIT2和GAPDH的荧光定量PCR标准曲线的相关性R²均大于0.98,表明线性关系良好。ISG15、IFIT2和GAPDH的融解曲线均为单峰,扩增产物单一,且峰值一致,表明建立的荧光定量PCR方法特异性良好。组内与组间的变异系数均小于0.2%,表明该方法重复性较好。对CDV感染宿主细胞前后的ISG15和IFIT2 mRNA表达水平进行检测,发现CDV感染后ISG15和IFIT2的表达量升高,表明ISG15和IFIT2在CDV感染过程中发挥重要作用。该结果为针对CDV与干扰素抗病毒研究的开展提供重要的技术手段,并为进一步揭...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞、病毒、菌种和载体
    1.2 主要试剂
    1.3 引物设计
    1.4 PCR扩增ISG15、IFIT2和GAPDH基因
    1.5 制备标准品
    1.6 SYBR Green Ⅰ real-time PCR反应条件的确定
    1.7 Real-time PCR的应用
2 结果
    2.1 犬源ISG15、IFIT2和GAPDH基因PCR扩增结果
    2.2 标准曲线的建立及融解曲线分析
    2.3 Real-time PCR的重复性分析
    2.4 Real-time PCR的应用
3 讨论



本文编号：3752946