猪圆环病毒2型抗原抗体荧光微球免疫层析快速检测方法的建立与应用

发布时间：2023-03-11 16:05

　　猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(Porcine Cirovirus Type 2,PCV2)感染所致,临床症状表现为断奶仔猪的多系统衰竭综合征、皮炎肾病综合征及母猪的繁殖障碍等,是严重危害养猪业健康发展的重要疾病之一,给世界各国养猪产业造成了巨大经济损失。该病快速诊断与检测技术的研究一直是各国学者研究的热点课题。虽然目前已经建立了聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、直接免疫荧光、病毒分离鉴定等诊断与检测技术,但缺少可快速读取检测数值的技术方法。因此,开展PCV2抗原抗体快速读取检测数值技术的研究对于该病的成功防控十分必要。本论文基于原核表达纯化的Cap蛋白,建立了PCV2抗体荧光微球免疫层析快速检测技术,基于可配对的PCV2单克隆抗体,建立了PCV2抗原荧光微球免疫层析快速检测技术,丰富了PCV2抗原抗体的快速检测技术。本研究成功扩增出702 bp的Cap基因,构建了pET30a(+)-Cap的原核表达载体,表达了分子量约为36 Ku的含有His标签Cap融合蛋白;通过条件优化,确定了最佳蛋白诱导表达条件,转速180 rpm,IPTG诱导终浓度为0.5 mM,诱导...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 猪圆环病毒病的概述
        1.1.1 病原
        1.1.2 猪圆环病毒病的流行病学
        1.1.3 发病机理
        1.1.4 症状
        1.1.5 猪圆环病毒病的诊断方法
    1.2 猪圆环病毒cap蛋白研究进展
        1.2.1 圆环cap蛋白的简介
        1.2.2 圆环cap蛋白的检测方法、疫苗研究
    1.3 荧光微球为标记物的免疫层析试纸条
        1.3.1 免疫层析试纸条
        1.3.2 荧光微球
        1.3.3 荧光微球在免疫层析技术中的应用
        1.3.4 胶体金免疫层析方法比较
        1.3.5 检测原理及结果判断
    1.4 研究的意义及目的
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 重组菌种
        2.1.2 荧光微球免疫层析材料等试验材料
        2.1.3 仪器
        2.1.4 试剂制备
    2.2 方法
        2.2.1 猪圆环Cap基因克隆及原核表达方法
        2.2.2 猪圆环病毒2 型抗体荧光微球免疫层析快速检测方法的建立与应用
        2.2.3 猪圆环病毒2 型抗原荧光微球免疫层析快速检测方法的建立与应用
3 结果与分析
    3.1 Cap基因克隆及重组表达质粒构建
    3.2 Cap重组蛋白的表达及鉴定
    3.3 蛋白表达条件的优化
    3.4 PCV2 抗体荧光微球免疫层析快速检测方法的建立与应用
    3.5 PCV2 抗原荧光微球免疫层析快速检测方法的建立与应用
4 讨论
    4.1 猪圆环cap蛋白表达
    4.2 PCV2 抗体荧光微球免疫层析快速检测试纸条的建立与应用
    4.3 PCV2 抗原荧光微球免疫层析快速检测试纸条的建立与应用
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3759822