动物细胞PNC结构中新发现的RNA-蛋白质间的多种相互作用

发布时间：2023-03-12 18:40

　　细胞核是具有高度组织性的结构,它有序清晰的排列成许多膜缺失的核小体,这种结构区划方式对于基本分子复合物来说被认为是最重要,最有效的形式。而我们的研究则主要集中在PNC (The Perinucleolar Compartment)这个核小体上。 PNC是一种特异性的细胞亚核结构,它与肿瘤恶性转化密切相关。细胞的高PNC含有率(含一个或多个PNC的细胞数量)与恶性肿瘤转移能力呈正相关,并在癌症模型中指示为预后不良。为了确认PNC与恶性肿瘤之间的功能联系,我们研究了与PNC相联接的分子复合物。研究显示PNC中含有大量由RNA聚合酶Ⅲ转录的RNA(如MRP,核糖核酸酶P)和RNA聚合酶Ⅱ结合的蛋白质(如PTB, CUGBP)。 为了进一步探索PNC中RNA与蛋白质之间的相互作用,我们运用pull down和免疫沉淀实验(IP)的方法,观察到了MRP RNA、PTB和CUGBP之间存在着相互影响的沉淀联系。使用高分辨率荧光显微系统(OMX)对细胞核中各个组分分布进行分析表明,MPR RNA与PTB和CUGBP的分布形式呈一种网络状系统。先前的研究已确认MRP RNA与hTERT蛋白或MRP R...

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
目录
1. 文献综述
    1.1 核形态与癌症
    1.2 PNC及其在恶性肿瘤中的作用
    1.3 PNC结构与DNA联系
    1.4 PNC结构与RNA的转录
    1.5 PNC结构的分子组分
    1.6 MRP RNA的RNP功能
    1.7 PTB蛋白与CUGBP蛋白的细胞功能
2. PNC结构中多种新发现的RNA与蛋白质间的相互作用
    2.1 材料与方法
        2.1.1 细胞培养和转染
        2.1.2 质粒
        2.1.3 Pull down与免疫沉淀反应
        2.1.4 原位杂交和免疫标记
        2.1.5 RNA提取和cDNA合成
        2.1.6 蛋白免疫印迹
        2.1.7 光脱色荧光恢复技术(FRAP)
        2.1.8 BrU结合试验
        2.1.9 显微镜检测及其图像分析
        2.1.10 甘油梯度沉积法
        2.1.11 PNC结构含有率的定量分析
        2.1.12 免疫组化
        2.1.13 生物素标记RNA pull down
        2.1.14 质谱分析法
        2.1.15 银凝胶
    2.2 结果与分析
        2.2.1 RNA聚合酶Ⅱ的转录抑制并不影响CUGBP或PTB蛋白在PNC结构中的富集
        2.2.2 细胞内MRP RNA存在于一个包含了CUGBP和PTB蛋白的复合物中
        2.2.3 OMX显微系统观察PNC结构中CUGBP、PTB蛋白与MRP RNA的共同区域分布情况
        2.2.4 检测显示蛋白组分已明确的MRP RNA复合物不富集于PNC结构中
        2.2.5 PNC结构各组分的互相补充
        2.2.6 MRP RNA、CUGBP蛋白和PTB蛋白的沉降特性
        2.2.7 PNC中的CUGBP与PTB与其核质中的CUGBP与PTB不同表现比较
        2.2.8 PNC相关复合物与新合成RNA的相互交错关联
        2.2.9 CUGBP-PTB-MRP RNA复合物中其他蛋白质的鉴定
        2.2.10 恶性肿瘤细胞中MRP RNA的表达
        2.2.11 PNC结构在甲状腺癌中的预后价值调查
        2.2.12 在PNC含有率较高的细胞系中IGF2BP2表达增加情况的检测
    2.3 讨论
    2.4 展望
参考文献
致谢
附录
攻读学位期间发表的学术论文和论著信息



本文编号：3761745