体细胞克隆技术的若干改进及其在转基因克隆牛中的应用

发布时间：2023-03-13 20:13

　　自从1997年世界首例体细胞克隆绵羊多莉诞生以来,体细胞核移植技术在多个物种中得以成功实践。转基因技术与体细胞克隆技术相结合是目前制备转基因大动物的主要手段。但由于克隆技术体系并不完善,至今仍未克服克隆效率低的问题。而转基因技术的介入,使得转基因克隆技术又增加了更多的变数。在转基因动物制备过程中出现了很多问题,如胚胎移植后妊娠率低、流产率高、胎儿发育异常、出生死亡率高等。而外源基因整合效率低,以及外源基因的沉默或丢失等现象更加制约了这项技术的实际应用。在总结了大量的前期工作的基础上,我们对以牛为主的体细胞克隆体系进行了系统的改进与调整。包括卵母细胞的成熟、去核时间段的选择、重构胚激活处理方式、胚胎培养、受体母牛的发情状态与胚胎发育时期的匹配等都进行了改进,形成了一套较为完整的牛体细胞克隆技术体系。利用改进的技术体系开展了大规模的转基因克隆牛生产。共完成对33043枚卵母细胞的去核与注核操作,得到融合胚胎26548枚,生产出各种转基因克隆囊胚7519枚,规模化克隆囊胚效率为28.3%。共移植受体牛1523头,妊娠414头,妊娠率为27.2%。通过将体细胞克隆技术的系统改进与大规模的转基因...

【文章页数】：99 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略词表
引言
    参考文献
第一部分 研究论文
    第一章 牛体细胞核移植技术的改进与优化
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        参考文献
    第二章 克隆胚胎的选择与受体母牛发情状态的匹配
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        参考文献
    第三章 多不饱和脂肪酸去饱和酶基因转基因克隆牛的制备
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        参考文献
    结论
第二部分 文献综述
    第一章 体细胞核移植研究进展
        1 体细胞核移植的发展历程
        2 牛体细胞核移植的研究进展
        3 体细胞核移植技术在应用中存在的问题
        4 体细胞核移植技术的应用前景
    第二章 转基因动物研究概论
        1 转基因动物研究进展
        2 转基因动物的制作方法
        3 转基因动物的后期检测
    参考文献
致谢
攻读学位期间发表的论文



本文编号：3762313