5-氮-2-脱氧胞苷和丁酸钠对水牛供体细胞生长、周期、凋亡及克隆胚胎发育的影响

发布时间：2023-03-18 19:18

　　体细胞核移植技术对于体外胚胎的生产具有重要的意义,但是体细胞核移植成功率非常低,影响了该技术的实际应用。目前认为体细胞核移植效率低的主要原因是供体细胞的不完全重编程。科学家们已经尝试使用DNA甲基化酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理核移植供体细胞或胚胎,从而提高表观遗传重编程的程度。本试验用DNA甲基化酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(Sodium butyrate, NaBu)处理水牛成纤维细胞,检测细胞形态、生长、周期和凋亡等,并移植到黄牛卵母细胞中,观察胚胎发育情况,从而筛选两种试剂处理供体细胞的最佳处理方式,得到如下结果与结论： 1.不同浓度的NaBu对水牛成纤维细胞形态、生长、细胞周期和凋亡的影响 用0、0.5、1.0、2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu处理水牛成纤维细胞,检测细胞形态、生长、周期和凋亡,确定处理细胞的最佳浓度。结果显示：0.5和1.0mmol/L NaBu处理的细胞形态正常,2.0、2.5和3.0mmol/L NaBu处理的细胞变大变长,并出现大量死亡；随着NaBu浓度的升高,对细胞生长抑制作用增强,...

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
    1 哺乳动物体细胞核移植研究进展
        1.1 异种克隆研究进展
    2 影响核移植效率的因素
        2.1 供体细胞的选择
        2.2 供体细胞的周期状态
        2.3 供体细胞的细胞系
    3 体细胞核移植表观遗传修饰研究进展
        3.1 DNA甲基化
        3.2 组蛋白乙酰化
        3.3 X染色体失活
        3.4 基因组印记
        3.5 端粒和端粒酶
    4 DNA甲基化与体细胞核移植
        4.1 DNA甲基化酶抑制剂5-aza-dC
    5 组蛋白乙酰化与体细胞核移植
    6 研究目的与意义
第二章 丁酸钠(NaBu)对供体细胞形态、生长、周期和凋亡的影响
    1 材料和方法
        1.1 试验材料
            1.1.1 主要仪器
            1.1.2 试剂
        1.2 试验方法
            1.2.1 水牛、黄牛耳成纤维细胞的制备与纯化
            1.2.2 丁酸钠(NaBu)对水牛成纤维细胞形态的检测
            1.2.3 丁酸钠(NaBu)处理水牛成纤维细胞生长曲线的测定
            1.2.4 丁酸钠(NaBu)对水牛成纤维细胞周期的测定
            1.2.5 丁酸钠(NaBu)对水牛成纤维细胞凋亡的测定
    2 结果与分析
    3 讨论
    4 小结
第三章 5-aza-dC和NaBu联合处理对供体细胞生长、周期、凋亡及克隆胚胎发育的影响
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
            1.1.1 主要仪器
            1.1.2 试验试剂和药品
            1.1.3 试验操作液
            1.1.4 显微操作针的制备
        1.2 试验方案与方法
            1.2.1 试验方案
            1.2.2 试验方法
        1.3 试验数据统计分析
    2 结果与分析
        2.1 5-aza-dC和NaBu联合处理对水牛成纤维细胞生长的影响
        2.2 5-aza-dC和NaBu联合处理对水牛成纤维细胞生长抑制率的影响
        2.3 5-aza-dC和NaBu联合处理对水牛成纤维细胞周期的影响
        2.4 5-aza-dC和NaBu联合处理对水牛成纤维细胞凋亡的影响
        2.5 5-aza-dC和NaBu联合处理供体细胞对水牛-黄牛异种核移植胚胎发育的影响
    3 讨论
        3.1 5-aza-dC和NaBu联合处理水牛成纤维细胞生长、细胞周期、细胞凋亡的影响
        3.2 异种与同种体细胞核移植胚胎发育
        3.3 NaBu对体细胞核移植胚胎发育的影响
        3.4 5-aza-dC和NaBu联合处理供体细胞对核移植胚胎发育的影响
    4 小结
总结
参考文献
附图
致谢



本文编号：3763716