猪轮状病毒NJ2012株VP8基因序列分析及原核表达

发布时间：2023-03-23 03:20

　　为深入研究猪轮状病毒VP8蛋白的结构和功能,以及研制新型猪轮状病毒疫苗,利用生物信息学软件DNAStar对本研究室保存的1株A组G9P7型猪轮状病毒NJ2012的VP8基因序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析;设计并合成1对引物,采用RT-PCR方法扩增VP8蛋白编码基因,用限制性核酸内切酶对目的片段与pET28a(+)原核表达载体进行双酶切,构建了重组原核表达载体,用IPTG诱导表达,并进行Western blot验证。结果显示:NJ2012毒株的VP8基因序列与参考毒株序列的核苷酸同源性为53.9%～99.2%,氨基酸同源性为42.1%～97.5%;VP8基因克隆成功,经测序与目的基因完全一致;经鉴定,构建的重组原核表达质粒pET28a-VP8能够在DE3宿主菌中表达,该蛋白以包涵体形式存在;Western blot结果显示该蛋白可与抗His-tag鼠单克隆抗体发生特异性反应。本研究实现了VP8蛋白在原核系统中稳定表达,为调查该蛋白的免疫原性及研制安全、高效的猪轮状病毒亚单位疫苗提供了参考。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 引物设计及PCR扩增
    1.3 VP8序列同源性分析
    1.4 目的基因原核表达载体的构建
    1.5 重组VP8蛋白的诱导表达与纯化
    1.6 重组VP8蛋白Western blot检测
2 结果与分析
    2.1 VP8序列同源性分析
    2.2 VP8基因PCR扩增
    2.3 重组表达质粒双酶切鉴定
    2.4 重组蛋白SDS-PAGE检测
    2.5 重组VP8蛋白Western blot检测
    2.6 重组VP8蛋白纯化后鉴定
3 讨论



本文编号：3768175