桔梗总多糖对CCCP诱导猪肺泡巨噬细胞凋亡的保护作用

发布时间：2023-03-23 17:45

　　桔梗为桔梗科草本植物桔梗的干燥根,具有宣肺祛痰、利咽和排脓消肿之功效。在桔梗中发现的化学成分有多糖、皂苷类、黄酮类、脂肪油、脂肪酸等。现代药理研究发现桔梗具有止咳平喘、抗氧化、免疫调节、抗炎抑菌、抗肿瘤、降血脂、降血糖、保肝、抗肺损伤等作用。桔梗多糖(PGPS)是中药桔梗的生物活性成分之一,具有抗氧化、增强免疫和抗肿瘤等作用。Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazine(CCCP)一种质子载体,线粒体氧化磷酸化解偶联剂,促使线粒体内膜对H⁺产生通透性,导致线粒体内膜两侧的膜电位丧失,诱导凋亡发生。线粒体是细胞凋亡的调节中枢,在细胞凋亡过程中起重要作用。本研究的目的是探讨桔梗总多糖(PGPS_t)对CCCP诱导的3D4/21细胞线粒体凋亡途径的潜在保护作用。采用CCK-8法测定细胞活力,结果显示,15μM的CCCP处理细胞的存活率为51.4%,PGPS_t(100μg/mL、200μg/mL)与CCCP共处理后细胞存活率分别为62.2%、78.6%,表明PGPS_t能够抑...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 桔梗概述
        1.1.1 桔梗的化学成分
        1.1.2 桔梗的药理作用
            1.1.2.1 止咳祛痰
            1.1.2.2 抗肿瘤
            1.1.2.3 抗炎
            1.1.2.4 免疫调节
            1.1.2.5 降血糖、降血脂
            1.1.2.6 保肝护肝
            1.1.2.7 抗氧化
    1.2 桔梗多糖的药理作用
    1.3 细胞凋亡
        1.3.1 线粒体途径
        1.3.2 内质网途径
        1.3.3 死亡受体途径
    1.4 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 细胞株和桔梗总多糖
    2.2 主要试剂
    2.3 主要仪器
    2.4 相关实验试剂的配制
        2.4.1 桔梗总多糖溶液的配制
        2.4.2 磷酸盐缓冲液(PBS)的配制
        2.4.3 10 ×Tris-Glycine Buffer(SDS-PAGE电泳缓冲液)配制
        2.4.4 1 ×蛋白转膜缓冲液配制
        2.4.5 10 ×TBS溶液的配制
        2.4.6 1 ×TBST溶液的配制
    2.5 实验方法
        2.5.1 细胞培养、复苏及冻存
        2.5.2 CCK-8 法检测细胞存活率
        2.5.3 流式细胞术检测细胞凋亡率
        2.5.4 激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞
        2.5.5 线粒体膜电位检测
        2.5.6 蛋白免疫印迹实验
        2.5.7 统计学分析
3 结果
    3.1 CCCP的细胞毒性作用
    3.2 PGPSt对3D4/21 细胞的增殖作用
    3.3 PGPSt对细胞的保护作用
    3.4 Annexin V-FITC 和 PI 双染法检测细胞凋亡
    3.5 流式细胞术检测线粒体膜电位变化
    3.6 激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态变化
    3.7 蛋白免疫印迹法检测细胞中Caspase-9和Cleaved Caspase-3 蛋白表达的变化
    3.8 蛋白免疫印迹法检测细胞中Bcl-2 蛋白表达的变化
4 讨论
    4.1 桔梗总多糖对细胞增殖的影响
    4.2 CCCP诱导细胞凋亡-线粒体途径的选择
    4.3 桔梗总多糖对细胞凋亡的影响
    4.4 桔梗总多糖对抗凋亡蛋白Bcl-2 的影响
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3768458