H9亚型禽流感病毒和鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条的研制与初步应用

发布时间：2023-03-24 00:16

　　H9亚型禽流感(Avian influenza,AI)和鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)感染是危害养禽业的重要呼吸道传染病,鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑等多种禽类均可感染。疫苗免疫是防控H9亚型禽流感发生与流行的主要手段,而鸡毒支原体病的防控,只有部分种鸡场使用疫苗。因此,血清学检测对于感染后的快速诊断和疫苗免疫后的抗体水平定量检测尤其重要。传统的血清学方法,一般需要专业人员操作,步骤繁琐,耗时长。胶体金检测操作简单,快速,成本低,无需专业的技术人员和昂贵的设备,可以在基层广泛应用。本实验室筛选获得了一株小鼠抗多种禽类IgY Fc片段的单抗,该单抗能与鸡、鸭、鹅等多种禽类血清反应,为建立一种能检测多种禽类血清抗体的胶体金试纸条方法奠定了基础。同时结合免疫定量速测仪的信号识别,建立了定量检测方法。本研究分别制备了一种适用于多种禽类H9亚型禽流感病毒抗体定量检测胶体金试纸条和一种适用于多种禽类鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条,既可定性检测,用于未免疫禽类鸡毒支原体感染后的快速诊断;也可定量检测,用于疫苗免疫后的抗体水平监测。主要研究结果如下:1.H9亚型禽流感病毒...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语(Abbreviation)
第一章 文献综述
    1 前言
    2 低致病性禽流感的研究进展
        2.1 低致病性禽流感概述
        2.2 检测方法的研究进展
            2.2.1 病毒的分离鉴定
            2.2.2 血清学检测方法
            2.2.3 分子生物学诊断方法
    3 鸡毒支原体的研究进展
        3.1 鸡毒支原体概述
        3.2 鸡毒支原体的检测方法
            3.2.1 病原的分离鉴定
            3.2.2 血清学方法
            3.2.3 分子生物学技术
    4 胶体金免疫层析技术的研究进展
        4.1 胶体金免疫层析技术概述
        4.2 胶体金免疫层析技术在动物医学方面的应用
    5 目的意义
第二章 H9亚型禽流感病毒抗体定量检测胶体金试纸条的研制与初步应用
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料
            2.1.1 菌株、质粒、细胞与试验动物
            2.1.2 试验仪器
            2.1.3 主要试剂的配制
        2.2 试验方法
            2.2.1 基因克隆与表达载体构建
            2.2.2 重组原核表达质粒的诱导表达
            2.2.3 表达产物的可溶性检测
            2.2.4 重组蛋白的纯化
            2.2.5 单克隆抗体制备
            2.2.6 H9 亚型禽流感病毒抗体定量检测胶体金试纸条的研制
            2.2.7 血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验
    3 结果与分析
        3.1 HA1₉ 基因的扩增
        3.2 pGEX-KG-HA1₉ 原核表达载体的构建
        3.3 目的蛋白的表达与纯化
        3.4 抗多种禽类IgY Fc片段单克隆抗体的制备与鉴定
        3.5 H9 亚型禽流感病毒抗体定量检测胶体金试纸条的研制
            3.5.1 胶体金溶液的制备与鉴定
            3.5.2 单克隆抗体的胶体金标记
            3.5.3 试纸条组成材料的选择
            3.5.4 溶液系统的选择
            3.5.5 包被浓度和金标喷量的确定
            3.5.6 试纸条性能检测
        3.6 H9 亚型禽流感病毒抗体定量检测胶体金试纸条的初步应用
    4 讨论
        4.1 H9 亚型AIV抗体检测试纸条检测方法的建立
        4.2 胶体金的制备
        4.3 试纸条的初步临床应用分析
    5 结论
第三章 鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条的研制与初步应用
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料同第二章
        2.2 试验方法
            2.2.1 基因的获取和表达载体构建
            2.2.2 重组原核表达质粒的诱导表达
            2.2.3 表达产物的可溶性检测同第二章
            2.2.4 重组蛋白的纯化
            2.2.5 鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条的研制
            2.2.6 动物试验
            2.2.7 血清平板凝集试验(SPA)
    3 结果与分析
        3.1 pGEX-KG-vlhA1.2 原核表达载体的构建
        3.2 目的蛋白的表达与纯化
        3.3 鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条的研制
            3.3.1 胶体金溶液的制备与鉴定同第二章
            3.3.2 单克隆抗体的胶体金标记同第二章
            3.3.3 试纸条组成材料的选择
            3.3.4 溶液系统的选择
            3.3.5 包被浓度和金标喷量的确定
            3.3.6 试纸条性能检测
        3.4 鸡毒支原体抗体检测胶体金试纸条的初步应用
            3.4.1 动物试验
            3.4.2 临床样品的检测
    4 讨论
        4.1 胶体金标记过程的影响因素
        4.2 试纸条的初步临床应用分析
    5 结论
参考文献
学术成果
致谢



本文编号：3769047