鸡白痢沙门氏菌毒力因子分析及对SPF鸡致病性研究

发布时间：2023-03-24 01:55

　　沙门氏菌的各种血清型可对人、畜、禽和野生动物引起疾病,沙门氏菌引发的疾病遍布世界各地,许多血清型的沙门氏菌可使人感染并发生食物中毒。近年来,禽沙门氏菌病的发生日趋严重,鸡白痢是其中的一种,而且此病在流行、发生、临床表现及剖检变化、药物敏感性等许多方面都发生了一些新的特点,目前在鸡白痢病方面还没有一种有效的疫苗防治。本研究对收集的禽源沙门氏菌进行鉴定,耐药性和毒力基因的分析,并筛选了其中两株鸡白痢沙门氏菌,运用病理组织学和免疫组织化学方法进行致病性研究。1、禽源沙门氏菌的鉴定及血清型分析本试验对收集的10株背景清晰的禽源沙门氏菌,进行培养,革兰氏染色、PCR鉴定、血清型测序分析及生化实验,并以肠炎沙门氏菌参考标准株作为对照。结果表明鸡源沙门氏菌中有2株为鸡白痢沙门氏菌,1株为猪霍乱沙门氏菌;鸭源沙门氏菌中有1株为肠炎沙门氏菌,6株为鼠伤寒沙门氏菌。2、禽源沙门氏菌的耐药基因检测及耐药性分析通过K-B(Kirby-Bauer)法对收集的10株沙门氏菌进行14种药物敏感试验及11种对应的耐药基因PCR检测,并以大肠杆菌ATCC25922作为对照。检测结果表明对链霉素的耐药率最高,达到了70%...

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
    1 沙门氏菌概述
        1.1 沙门氏菌生物学特性
        1.2 沙门氏菌病原学特性
        1.3 沙门氏菌的鉴定
    2 沙门氏菌的耐药性
    3 沙门氏菌毒力因子研究
        3.1 毒力质粒
        3.2 毒素
        3.3 鞭毛
        3.4 菌毛
        3.5 毒力岛
    4 鸡白痢沙门氏菌致病性
        4.1 临床特征及病理变化
        4.2 致病机制
        4.3 鸡白痢沙门氏菌毒力蛋白SpiC在致病性中的作用
        4.4 鸡白痢沙门氏菌与宿主细胞死亡
    5 研究目的与意义
材料和方法
    1 材料
        1.1 试验动物
        1.2 供试菌株
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器设备
        1.5 药敏纸片
    2 试验方法
        2.1 主要试剂的配置
        2.2 禽源沙门氏菌的复苏培养及鉴定
            2.2.1 细菌复苏及培养
            2.2.2 革兰氏染色
            2.2.3 PCR鉴定
            2.2.4 生化鉴定
        2.3 禽源沙门氏菌的药物敏感性试验
        2.4 禽源沙门氏菌的耐药基因检测
            2.4.1 耐药基因分类
            2.4.2 引物合成
            2.4.3 PCR的扩增
        2.5 禽源沙门氏菌的毒力基因检测
            2.5.1 引物合成
            2.5.2 PCR的扩增
        2.6 鸡白痢沙门氏菌致病性试验
            2.6.1 生长曲线的测定
            2.6.2 动物致死性感染试验
            2.6.3 半数致死量(LD50)的测定
            2.6.4 动物感染模型的建立
            2.6.5 载菌量的测定
            2.6.6 HE染色
            2.6.7 免疫组织化学染色
    3 数据统计与处理
结果与分析
    1 禽源沙门氏菌鉴定
        1.1 革兰氏染色
        1.2 PCR鉴定结果
        1.3 生化鉴定结果
    2 药敏试验结果
    3 耐药基因检测结果
    4 毒力基因检测结果
    5 致病性试验结果
        5.1 鸡白痢沙门氏菌生长曲线的测定
        5.2 致死性感染结果
        5.3 LD50测定结果
        5.4 感染鸡白痢沙门氏菌后雏鸡的临床及剖检变化
            5.4.1 鸡白痢沙门氏菌S0701株感染组的临床及剖检变化
            5.4.2 鸡白痢沙门氏菌S0702株感染组的临床及剖检变化
        5.5 感染鸡白痢沙门氏菌后组织病理学变化
            5.5.1 鸡白痢沙门氏菌S0701株感染雏鸡的组织病理学变化
            5.5.2 鸡白痢沙门氏菌S0702株感染雏鸡的组织病理学变化
        5.6 乳酸环丙沙星给药后肝脏和盲肠载菌量的变化
        5.7 IHC检测感染后肝组织中毒力蛋白SpiC的表达变化
            5.7.1 鸡白痢沙门氏菌S0701株感染后毒力蛋白SpiC的表达变化
            5.7.2 鸡白痢沙门氏菌S0702感染后毒力蛋白SpiC的表达变化
        5.8 肝组织损伤与毒力蛋白SpiC的分布关系
        5.9 IHC检测感染后肝组织中Caspase-1的表达变化
            5.9.1 IHC检测S0701株感染后肝组织中Caspase-1的表达变化
            5.9.2 IHC检测S0702株感染后肝组织中Caspase-1的表达变化
        5.10 IHC检测感染后肝组织中Caspase-3的表达变化
            5.10.1 IHC检测S0701株感染后肝组织中Caspase-3的表达变化
            5.10.2 IHC检测S0702株感染后肝组织中Caspase-3的表达变化
讨论
    1 禽源沙门氏菌的耐药性与耐药基因
    2 禽源沙门氏菌毒力基因
    3 雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后动态组织病理学变化
    4 雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后肝损伤与毒力蛋白SpiC分布关系
    5 雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后肝组织中细胞死亡相关指标分析
        5.1 雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后Caspase-1动态变化
        5.2 雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后Caspase-3动态变化
结论
参考文献
致谢



本文编号：3769206