山羊痘病毒069蛋白的表达与结构分析

发布时间：2023-03-25 05:25

　　为了分析山羊痘病毒THx株069基因的分子特征及其编码蛋白的生物学功能,本试验应用PCR技术对069基因进行扩增,并构建原核表达载体,经测序鉴定后用IPTG诱导表达其蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。用DNAStar及Mega软件对GenBank登录的24个该基因参考序列进行同源性比对并作遗传进化树分析;同时采用生物信息学分析方法对069蛋白信号肽、跨膜结构、糖基化位点、磷酸化位点、抗原决定簇、亲水性、二级及三级空间结构进行预测。结果表明:GTPV-069号基因全长为573 bp,与参考株GTPV-pellor相似度高达97.19%,经同源性比对与遗传进化树分析发现,山羊痘病毒THx株069基因序列与绵羊痘亲缘关系较近,在同一分支上,与疙瘩皮肤病和其他山羊痘亲缘关系较远。SDS-PAGE鉴定表明069蛋白大量表达于上清中,条带清晰。Western blot结果证明069蛋白与His标签确实进行了融合表达;生物信息学分析发现GTPV-069蛋白无信号肽、含有跨膜结构,跨膜区在29～51 aa之间,为典型的膜蛋白。069蛋白含有8个抗原决定簇、1个糖基化位点...

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 毒株、菌株及载体
    1.2 主要药品及试剂
    1.3 pET42b-069克隆载体的构建
        1.3.1 引物设计与合成
        1.3.2 GTPV基因组的提取
        1.3.3 GTPV-069基因的PCR扩增
        1.3.4 069基因与原核表达载体的连接与鉴定
    1.4 目的基因069号核苷酸及氨基酸序列分析
    1.5 GTPV-069号蛋白表达鉴定
    1.6 GTPV-069蛋白的生物信息学分析
2 结果
    2.1 PCR扩增GTPV-069基因
    2.2 GTPV-069菌液PCR鉴定结果
    2.3 GTPV-069重组质粒双酶切鉴定结果
    2.4 GTPV-069蛋白SDS-PAGE电泳结果
    2.5 GTPV-069 Western blot检测结果
    2.6 GTPV-069目的基因序列
    2.7 GTPV-THx株069基因遗传进化特征分析
    2.8 GTPV-069生物信息学分析结果
        2.8.1 信号肽及跨膜结构的预测结果
        2.8.2 糖基化位点、磷酸化位点和抗原决定簇的预测结果
        2.8.3 蛋白质抗原指数和β-转角的预测结果
        2.8.4 蛋白质亲水性和柔韧性的预测
        2.8.5 蛋白二级结构和三级结构的分析预测
3 讨论



本文编号：3770635