鸭坦布苏病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代致弱研究
发布时间：2023-04-02 05:01
自2010年4月以来，以引起蛋鸭产蛋下降为特征的鸭坦布苏病毒病的爆发，给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。目前，该病已经在我国大部分养鸭地区流行。目前，尚无商品化的鸭坦布苏病毒病疫苗用来预防该病。 在鸭坦布苏病毒病在我国发生的初期，本课题组就分离到了引起该病的病毒，鸭坦布苏病毒FX2010株。为了获得鸭坦布苏病毒的弱毒株并且寻找一些与病毒毒力致弱相关的关键位点，我们将鸭坦布苏病毒FX2010株在鸡胚成纤维细胞（CEF）上进行了连续传代培养。病毒传代培养至第3代以后即出现明显的细胞病变，而且随着传代次数增多，病毒接种后24-36小时就出现细胞病变。这些结果表明，连续传代培养使病毒逐渐适应了CEF细胞。鸭坦布苏病毒FX2010株在CEF上传173代后，用有限稀释法进行了5次纯化，然后继续在CEF上传代2次至第180代，获得了FX2010-180P株。FX2010-180P接种SPF鸡胚后，发现该毒株对鸡胚的致病力减弱了。 为了探讨鸭坦布苏病毒奉贤分离株（FX2010）在CEF上的传代病毒FX2010-180P对鸭的致病力，依次进行了四次动物感染试验。（1）将FX2010和FX2010-180...
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要 Abstract 第一章 引言
1.1 鸭坦布苏病毒概述
1.2 鸭坦布苏病毒的形态结构
1.3 鸭坦布苏病毒在细胞内的复制
1.4 鸭坦布苏病毒的培养特性
1.5 鸭坦布苏病毒的流行病学
1.6 鸭坦布苏病毒的临床症状与病理特征
1.6.1 临床症状
1.6.2 病理特征
1.7 鸭坦布苏病毒的诊断
1.7.1 病毒分离鉴定
1.7.2 血清学检测
1.7.3 分子生物学诊断方法
1.8 鸭坦布苏病毒的防控
1.9 研究的目的及意义 第二章 鸭坦布苏病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代培养
摘要
2.1 材料
2.1.1 病毒
2.1.2 细胞
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 FX2010 在 CEF 上的传代培养
2.2.2 病毒的克隆纯化
2.2.3 传代毒毒价测定
2.2.4 病毒对鸡胚的致病力测定
2.3 实验结果
2.3.1 FX2010 在 CEF 上的传代培养
2.3.2 病毒克隆纯化结果
2.3.3 传代毒毒价测定
2.3.4 病毒对鸡胚的致病力试验的测定结果
2.4 讨论 第三章 鸭坦布苏病毒 FX2010-180P 毒对鸭的致病力
摘要
3.1 材料
3.1.1 病毒和细胞
3.1.2 试验动物
3.2 方法
3.2.1 雏鸭鼻腔感染病毒
3.2.2 雏鸭肌肉注射感染病毒
3.2.3 产蛋鸭肌肉注射感染病毒
3.2.4 病毒感染雏鸭引起的病毒血症
3.2.5 荧光定量 PCR
3.3 结果
3.3.1 鼻腔感染病毒对雏鸭的致病力
3.3.1.1 临床表现
3.3.1.2 剖检病变
3.3.1.3 病理变化
3.3.1.4 病毒分离
3.3.2 肌肉注射病毒对雏鸭的致病力
3.3.2.1 临床表现
3.3.2.2 剖检病变
3.3.2.3 病理变化
3.3.2.4 病毒分离
3.3.3 肌肉注射病毒对产蛋鸭的致病力
3.3.3.1 临床表现
3.3.3.2 剖检病变
3.3.3.3 病理变化
3.3.3.4 病毒分离
3.3.4 病毒感染鸭引起的病毒血症
3.4 讨论
3.4.1 病毒对雏鸭致病力的评价指标
3.4.2 剖检时间
3.4.3 病毒对产蛋鸭致病力的评价指标
3.4.4 传代病毒的致病力减弱
3.4.5 关于感染途径 第四章 鸭坦布苏病毒 FX2010-180P 基因序列测定及分析
摘要
4.1 材料
4.1.1 病毒
4.1.2 主要试剂和仪器
4.1.3 引物设计与合成
4.2 方法
4.2.1 病毒 RNA 提取和 cDNA 合成
4.2.2 病毒全基因的 PCR 扩增
4.2.3 PCR 产物凝胶回收与纯化
4.2.4 目的片段的连接转化
4.2.5 阳性克隆的鉴定和序列测定
4.2.6 FX2010-180P 株序列分析
4.3 结果及分析
4.3.1 基因变异氨基酸突变情况
4.3.2 基因变异未导致氨基酸突变情况
4.3.3 病毒遗传变异
4.4 讨论 第五章 全文结论 参考文献 致谢 作者简历
本文编号：3778591
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【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要 Abstract 第一章 引言
1.1 鸭坦布苏病毒概述
1.2 鸭坦布苏病毒的形态结构
1.3 鸭坦布苏病毒在细胞内的复制
1.4 鸭坦布苏病毒的培养特性
1.5 鸭坦布苏病毒的流行病学
1.6 鸭坦布苏病毒的临床症状与病理特征
1.6.1 临床症状
1.6.2 病理特征
1.7 鸭坦布苏病毒的诊断
1.7.1 病毒分离鉴定
1.7.2 血清学检测
1.7.3 分子生物学诊断方法
1.8 鸭坦布苏病毒的防控
1.9 研究的目的及意义 第二章 鸭坦布苏病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代培养
摘要
2.1 材料
2.1.1 病毒
2.1.2 细胞
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 FX2010 在 CEF 上的传代培养
2.2.2 病毒的克隆纯化
2.2.3 传代毒毒价测定
2.2.4 病毒对鸡胚的致病力测定
2.3 实验结果
2.3.1 FX2010 在 CEF 上的传代培养
2.3.2 病毒克隆纯化结果
2.3.3 传代毒毒价测定
2.3.4 病毒对鸡胚的致病力试验的测定结果
2.4 讨论 第三章 鸭坦布苏病毒 FX2010-180P 毒对鸭的致病力
摘要
3.1 材料
3.1.1 病毒和细胞
3.1.2 试验动物
3.2 方法
3.2.1 雏鸭鼻腔感染病毒
3.2.2 雏鸭肌肉注射感染病毒
3.2.3 产蛋鸭肌肉注射感染病毒
3.2.4 病毒感染雏鸭引起的病毒血症
3.2.5 荧光定量 PCR
3.3 结果
3.3.1 鼻腔感染病毒对雏鸭的致病力
3.3.1.1 临床表现
3.3.1.2 剖检病变
3.3.1.3 病理变化
3.3.1.4 病毒分离
3.3.2 肌肉注射病毒对雏鸭的致病力
3.3.2.1 临床表现
3.3.2.2 剖检病变
3.3.2.3 病理变化
3.3.2.4 病毒分离
3.3.3 肌肉注射病毒对产蛋鸭的致病力
3.3.3.1 临床表现
3.3.3.2 剖检病变
3.3.3.3 病理变化
3.3.3.4 病毒分离
3.3.4 病毒感染鸭引起的病毒血症
3.4 讨论
3.4.1 病毒对雏鸭致病力的评价指标
3.4.2 剖检时间
3.4.3 病毒对产蛋鸭致病力的评价指标
3.4.4 传代病毒的致病力减弱
3.4.5 关于感染途径 第四章 鸭坦布苏病毒 FX2010-180P 基因序列测定及分析
摘要
4.1 材料
4.1.1 病毒
4.1.2 主要试剂和仪器
4.1.3 引物设计与合成
4.2 方法
4.2.1 病毒 RNA 提取和 cDNA 合成
4.2.2 病毒全基因的 PCR 扩增
4.2.3 PCR 产物凝胶回收与纯化
4.2.4 目的片段的连接转化
4.2.5 阳性克隆的鉴定和序列测定
4.2.6 FX2010-180P 株序列分析
4.3 结果及分析
4.3.1 基因变异氨基酸突变情况
4.3.2 基因变异未导致氨基酸突变情况
4.3.3 病毒遗传变异
4.4 讨论 第五章 全文结论 参考文献 致谢 作者简历
本文编号：3778591
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