猫疱疹病毒Ⅰ型感染细胞后microRNA表达谱分析及其调控Ⅰ型干扰素通路的研究

发布时间：2023-04-02 17:21

　　猫疱疹病毒I型(Feline Herpesvirus 1),是α-疱疹病毒亚科,水泡病毒属的成员,主要引起猫的病毒性鼻气管炎。FHV-1只有一个血清型,且感染谱很窄,通常只感染猫科动物(包括虎、豹等)。临床上,FHV-1感染可引起为高热、食欲减退、流涎、出现眼鼻分泌物,严重的还会导致结膜炎甚至失明。与其他疱疹病毒类似,潜伏感染也是本病的一个典型特征,因此没有明显症状的病猫也是一个重要的潜在传染源。针对病毒感染,宿主细胞激活各种抗病毒防御机制来抑制病毒复制。虽然猫疱疹病毒1型(FHV-1)通过多种不同的方式调控宿主的早期先天免疫反应,但宿主可以通过未知的机制再次激活抗病毒反应来对抗病毒入侵。microRNA(miRNA)作为宿主的一类调节因子,可以参与调节宿主天然免疫应答来对抗病毒感染。为了探究miRNAs在FHV-1感染中的重要作用,我们利用Illumina高通量测序的方法对猫肾细胞系(CRFK)感染FHV-1前后的小RNA文库进行了测序。通过生物信息学分析首次发现了11个来源于FHV-1基因组的vmiRNA前体茎环结构,共编码19个vmiRNAs成熟体。与其他α-疱疹病毒相似,vmi...

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 猫疱疹病毒Ⅰ型概述
        1.1.1 猫疱疹病毒Ⅰ型的病原学特性
        1.1.2 猫疱疹病毒Ⅰ型的流行病学概况
        1.1.3 猫疱疹病毒Ⅰ型的临床症状
        1.1.4 猫疱疹病毒Ⅰ型的致病机理
        1.1.5 猫疱疹病毒Ⅰ型的潜伏感染
        1.1.6 猫疱疹病毒Ⅰ型的诊断
        1.1.7 猫疱疹病毒Ⅰ型的治疗
        1.1.8 猫疱疹病毒Ⅰ型的防控
    1.2 microRNA(miRNA)综述
        1.2.1 miRNA的发现和产生
        1.2.2 miRNA的作用机制
        1.2.3 miRNA先天免疫中的调控作用
        1.2.4 miRNA与病毒的相互作用
        1.2.5 疱疹病毒miRNA研究进展
    1.3 目的和意义
第二章 FHV-1 编码vmiRNA的预测与分析
    2.1 材料和方法
        2.1.1 毒株和细胞
        2.1.2 试剂和耗材
        2.1.3 仪器和设备
        2.1.4 测序样品准备
        2.1.5 测序
        2.1.6 测序结果分析
        2.1.7 FHV-1 编码的vmiRNA验证
        2.1.8 FHV-1 编码的vmiRNA靶基因预测和分析
    2.2 结果
        2.2.1 测序数据质量评估
        2.2.2 测序结果分类和注释
        2.2.3 FHV-1 编码的vmiRNA的预测和分析
        2.2.4 FHV-1 编码的vmiRNA的验证
        2.2.5 FHV-1 编码的vmiRNA靶基因的预测和分析
    2.3 讨论
第三章 宿主miRNA表达谱的分析与鉴定
    3.1 材料和方法
        3.1.1 毒株、细胞
        3.1.2 试剂和耗材
        3.1.3 仪器和设备
        3.1.4 测序样品准备及小RNA文库的构建
        3.1.5 共有及特有序列分析
        3.1.6 已知宿主miRNA表达谱分析
        3.1.7 宿主miRNA的表达丰度分析
        3.1.8 新miRNA的预测和碱基偏好性分析
        3.1.9 差异表达的宿主miRNA分析
        3.1.10 差异表达的宿主miRNA验证
        3.1.11 差异表达的宿主miRNA靶基因预测和分析
        3.1.12 宿主miRNA对 FHV-1 复制的影响
    3.2 结果
        3.2.1 共有及特有序列分析
        3.2.2 已知宿主miRNA表达谱分析
        3.2.3 宿主miRNA的表达丰度分析
        3.2.4 新miRNA的预测和碱基偏好性分析
        3.2.5 差异表达的宿主miRNA分析和验证
        3.2.6 差异表达的宿主miRNA靶基因预测和分析
        3.2.7 宿主miRNA对 FHV-1 复制的影响
    3.3 讨论
第四章 miR-26a和 miR-101 抑制FHV-1 复制
    4.1 材料和方法
        4.1.1 毒株、细胞和载体
        4.1.2 试剂和耗材
        4.1.3 仪器和设备
        4.1.4 RNA提取
        4.1.5 实时荧光定量PCR
        4.1.6 miRNA和 si RNA转染
        4.1.7 病毒蚀斑实验
        4.1.8 绝对荧光定量PCR
        4.1.9 Western Blot检测
        4.1.10 鼠源UL42多克隆抗体制备
        4.1.11 micro RNA靶基因预测及质粒构建
        4.1.12 双荧光素酶报告实验
        4.1.13 免疫荧光实验(IFA)
        4.1.14 FHV-1生长曲线的测定
        4.1.15 统计学分析
    4.2 结果
        4.2.1 FHV-1 感染引起miR-26a和 miR-101 表达上调
        4.2.2 FHV-1 感染通过c GAS介导的通路上调miR-26a和 miR-101 的表达
        4.2.3 miR-26a和 miR-101 显著抑制病毒复制
        4.2.4 miR-26a和 miR-101 增强JAK-STAT抗病毒信号通路
        4.2.5 miR-26a和 miR-101 参与Ⅰ型干扰素的产生
        4.2.6 miR-26a和 miR-101 靶向SOCS5 基因
        4.2.7 SOCS5 表达量在FHV-1 感染后显著降低
        4.2.8 SOCS5 抑制Ⅰ型干扰素信号通路并促进FHV-1 复制
        4.2.9 miR-26a和 miR-101 通过调节SOCS5 增强Ⅰ型干扰素抗病毒信号
    4.3 讨论
第五章 全文结论
参考文献
附录 A
附录 B
致谢
作者简介



本文编号：3779628