犬腺病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2023-04-03 00:48

　　为建立犬腺病毒(CAV)和犬细小病毒(CPV)双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的CAV Hexon基因序列和CPV VP2基因序列,设计了2对特异性引物和2条Taq Man探针。经过条件优化建立了检测CAV和CPV的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,以含有CAV Hexon基因和CPV VP2基因的重组质粒标准品为模板绘制标准曲线,其相关系数(R²)均大于0.990,CAV和CPV荧光定量PCR均具有良好的线性关系。特异性试验结果显示,该方法仅对CAV-I型、CAV-II型和CPV检测结果为阳性,而对犬瘟热病毒、犬副流感病毒和犬冠状病毒检测结果均为阴性,表明其特异性强。该方法的敏感性检测结果显示其检测下限为10拷贝/μL。重复性试验结果显示该方法的组内和组间变异系数均小于2%,表明该方法重复性好。利用普通PCR方法与本实验建立的方法分别对感染CAV(10份)和CPV(27份)的犬模拟病料样品进行检测,两种方法对CAV和CPV检测的符合率分别可达100%和96.30%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感、准确...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要实验材料
    1.2引物、探针的设计与合成
    1.3 重组质粒标准品的构建与鉴定
    1.4 双重荧光定量PCR检测方法反应条件的优化
    1.5 双重荧光定量PCR标准曲线的绘制
    1.6 特异性试验
    1.7 敏感性试验
    1.8 重复性试验
    1.9 临床模拟样品检测
2 结果
    2.1 质粒标准品的构建与鉴定
    2.2 双重荧光定量PCR反应条件的优化及标准曲线的建立
    2.3 特异性试验结果
    2.4 敏感性试验结果
    2.5 重复性试验结果
    2.6 临床模拟样品检测结果
3 讨论



本文编号：3780305