水貂阿留申病毒VP2蛋白适配体的筛选与初步应用研究

发布时间：2023-04-05 18:08

　　水貂阿留申病(Aleutian Mink Disease,AD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian Mink Disease Virus,AMDV)感染引起的自身免疫功能发生紊乱、衰竭的慢性持续性传染病。该病引起幼貂死亡和成年貂貂皮质量和生殖力下降,严重影响了水貂养殖业的发展。针对该病目前没有商品化疫苗,貂场主要通过定期筛查、检疫、淘汰阳性个体达到种群的净化。随着我国水貂养殖业的飞速发展,开展水貂的实验动物化研究迫在眉睫,开展疫病诊断和治疗制剂研究前景广阔。核酸适配体是从体外合成的寡核苷酸文库中利用指数富集配体系统进化技术(SELEX)筛选得到的单链核苷酸分子(RNA或ssDNA),通过折叠形成高级结构,与特定靶标高效结合影响其生物学功能。核酸适配体以高亲和力、高特异性、易修饰、可大量合成、化学性质稳定等优势,在毒素、肿瘤细胞、致病菌和病毒等诊断技术研究中应用广泛。因此,核酸适配体作为单克隆抗体的有益补充,可为兽医病原微生物研究提供新思路和新工具。本研究采用磁珠SELEX技术筛选了AMDV VP2蛋白的核酸适配体。经过10轮筛选,获得与靶蛋白具有明显亲和力的富集文库。通过高通量测序、...

【文章页数】：59 页

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略表
第一章 引言
    1.1 水貂阿留申病毒概述
        1.1.1 AMDV的分子生物学特性
        1.1.2 AMDV的致病机理
        1.1.3 AD的流行病学
        1.1.4 AD的诊断
        1.1.5 AD的防治
    1.2 适配体的概述
        1.2.1 SELEX技术
        1.2.2 适配体的特点
        1.2.3 适配体的筛选方法
        1.2.4 适配体的应用
    展望
第二章 水貂阿留申病毒VP2蛋白适配体的筛选
    2.1 材料
        2.1.1 蛋白与主要试剂
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 试剂的配制
    2.2 方法
        2.2.1 蛋白偶联磁珠
        2.2.2 文库的构建及引物合成
        2.2.3 PCR扩增条件的优化
        2.2.4 水貂阿留申病毒VP2蛋白适配体的筛选
        2.2.5 流式监测筛选过程
        2.2.6 高通量测序分析
    2.3 结果
        2.3.1 蛋白偶联磁珠
        2.3.2 PCR扩增条件的优化结果
        2.3.3 水貂阿留申病毒VP2蛋白适配体的筛选
        2.3.4 流式监测筛选过程
        2.3.5 高通量测序结果分析
    2.4 讨论
第三章 AMDV VP2蛋白适配体的特性及结构分析
    3.1 材料
        3.1.1 蛋白、病毒与抗体
        3.1.2 主要试剂与仪器
        3.1.3 试剂的配制
    3.2 方法
        3.2.1 适配体序列的合成
        3.2.2 适配体与AMDV VP2蛋白的亲和力分析
        3.2.3 适配体与AMDV VP2蛋白的特异性分析
        3.2.4 优势适配体与AMDV标准抗原的亲和力分析
        3.2.5 优势适配体的结构分析
    3.3 结果
        3.3.1 适配体与AMDV VP2蛋白的亲和力分析结果
        3.3.2 适配体与AMDV VP2蛋白的特异性分析结果
        3.3.3 优势适配体与AMDV标准抗原的亲和力分析结果
        3.3.4 优势适配体的结构分析结果
    3.4 讨论
第四章 DAS-ELOSA检测的建立
    4.1 材料
        4.1.1 细胞、病毒、抗体与实验动物
        4.1.2 主要试剂与仪器
    4.2 方法
        4.2.1 单克隆抗体的选择
        4.2.2 腹水的制备与纯化
        4.2.3 反应条件的优化
        4.2.4 判定标准的确定
        4.2.5 特异性分析
        4.2.6 敏感性分析
        4.2.7 符合率分析
    4.3 结果
        4.3.1 单克隆抗体的选择结果
        4.3.2 腹水的制备与纯化结果
        4.3.3 条件优化结果
        4.3.4 判定标准的确定
        4.3.5 特异性分析结果
        4.3.6 敏感性分析结果
        4.3.7 符合率分析结果
    4.4 讨论
第五章 适配体对病毒复制的影响
    5.1 材料
        5.1.1 病毒、抗体与细胞
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 主要仪器
    5.2 方法
        5.2.1 AMDV-Utah株感染体系建立
        5.2.2 AMDV实时荧光定量PCR扩增
        5.2.3 MTT试验
        5.2.4 细胞水平适配体对病毒复制的影响
        5.2.5 优势适配体的特性及结构分析
    5.3 结果
        5.3.1 AMDV-Utah株感染体系建立
        5.3.2 AMDV实时荧光定量PCR扩增
        5.3.3 MTT试验
        5.3.4 细胞水平适配体对病毒复制的影响
        5.3.5 优势适配体的特性及结构分析结果
    5.4 讨论
第六章 全文结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3783877