基于免疫磁分离和酶催化放大的禽流感病毒快速检测方法
发布时间：2023-04-06 21:12
病毒性传染病如非典型性肺炎、禽流感、艾滋病等严重威胁到人们的健康。病毒的快速高灵敏检测对于科学应对病毒性传染病、有效地控制病毒的扩散和传播等方面有着重要的意义。然而,目前病毒检测的方法：如病毒的分离和鉴定、血清学检测方法以及酶联免疫吸附法(ELISA)操作繁琐、费时、灵敏度低；聚合酶链式反应(PCR)灵敏度较高,但是该方法需要昂贵的试剂、专门的操作人员以及专业的仪器,不适用于病毒的现场检测。 电化学免疫分析方法是一种新型的免疫分析法,它将免疫反应的高选择性与电化学检测的高灵敏性相结合,具有高灵敏度、低成本、低能耗、易于微型化等优点,因此受到了科研工作者的广泛关注。纳米材料由于其在光、电、磁等方面的独特性能,可以大大提高生物传感器的性能。其中,磁性纳米颗(MBs)由于其大的比表面积、快速的反应动力学以及好的分离富集能力而被广泛地应用于免疫分析中。采用磁球作为免疫反应的载体不仅可以简化预处理过程,减少免疫反应时间,同时还可以放大检测信号。因此免疫磁分离在细胞分离、病原体检测等方面得到了越来越广泛的应用。本工作将免疫磁分离和酶催化放大相结合,发展了几种适用于现场的病毒快速检测方法,主要包括以...
【文章页数】：144 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
论文创新点
摘要
Abstract
英文缩略表
第1章 绪论
1.1 引言
1.2 禽流感及禽流感病毒概述
1.2.1 禽流感病毒的结构及分类
1.2.2 病毒的检测方法
1.3 电化学免疫分析法和电化学免疫传感器
1.3.1 电化学免疫分析法的原理
1.3.2 电化学免疫传感器的分类
1.3.3 电化学免疫分析中的信号标记及其放大策略
1.4 基于磁球的电化学免疫分析法
1.4.1 基于磁球的电化学免疫分析法的分类
1.4.2 小结
1.5 本论文的出发点与主要工作
参考文献
第2章 基于免疫磁分离和酶催化放大的禽流感病毒电化学免疫传感器
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 实验试剂与仪器
2.2.2 磁性金电极的设计和制作
2.2.3 辣根过氧化物酶修饰磁球(HRP-MB)的制备
2.2.4 免疫磁球的制备与表征
2.2.5 生物素化抗体的制备
2.2.6 H9N2禽流感病毒的检测步骤
2.2.7 特异性实验
2.2.8 复杂样品中禽流感病毒的检测
2.3 结果与讨论
2.3.1 基于磁球的电化学免疫传感器检测H9N2禽流感病毒的原理
2.3.2 免疫磁球的表征
2.3.3 HRP-MB在磁性电极上的电化学信号
2.3.4 检测条件的优化
2.3.5 禽流感病毒的检测
2.3.6 方法的特异性
2.3.7 鸡粪样品中H9N2禽流感病毒的检测
2.3.8 与直接在电极上构建的电化学免疫传感器相比较
2.4 结论
参考文献
第3章 基于免疫磁分离和双酶放大的禽流感病毒电化学免疫传感器
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 实验试剂与仪器
3.2.2 磁性电极的制作、修饰和表征
3.2.3 葡萄糖氧化酶修饰磁球(HRP-MB)的制备
3.2.4 基于磁球的双酶放大法检测H9N2禽流感病毒
3.2.5 特异性实验
3.2.6 复杂样品中H9N2禽流感病毒的检测
3.3 结果与讨论
3.3.1 层层自组装电极的表征
3.3.2 A-(Con A/HRP)3电极表面所固定的HRP米氏常数的计算
3.3.3 A-(Con A/HRP)3电极的重现性和稳定性
3.3.4 GOD-MB在HRP修饰磁性电极上的电化学信号
3.3.5 检测条件的优化
3.3.6 采用基于磁球的双酶放大法检测H9N2禽流感病毒
3.3.7 方法的特异性
3.3.8 复杂样品中H9N2禽流感病毒的检测
3.3.9 方法的普适性
3.4 结论
参考文献
第4章 基于免疫磁分离和酶促金属化的禽流感病毒电化学免疫传感器
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 实验试剂与仪器
4.2.2 磁性电极的设计和制作
4.2.3 禽流感病毒的检测
4.3 结果与讨论
4.3.1 检测原理
4.3.2 影响基于酶促金属化电化学信号的因素
4.3.3 禽流感病毒的检测
4.3.4 酶催化信号与酶促金属化信号的比较
4.3.5 与直接在电极上构建的电化学免疫传感器相比较
4.3.6 基于酶促金属化和双电极信号转换的信号放大策略
4.4 结论
参考文献
第5章 基于酶促金属化的比色分析法以及禽流感病毒的可视化检测
5.1 引言
5.2 实验部分
5.2.1 实验试剂与仪器
5.2.2 纳米金的制备及表征
5.2.3 酶促金属化反应机理
5.2.4 碱性磷酸酶的检测
5.2.5 禽流感病毒的检测
5.3 结果与讨论
5.3.1 基于酶促金属化检测碱性磷酸酶的原理
5.3.2 基于酶促金属化检测碱性磷酸酶的反应机理探讨
5.3.3 碱性磷酸酶的检测
5.3.4 可视化检测禽流感病毒
5.4 结论
参考文献
第6章 总结与展望
6.1 主要工作
6.2 展望
附录：攻读博士学位期间已发表和待发表的科研成果
致谢
本文编号：3784425
【文章页数】：144 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
论文创新点
摘要
Abstract
英文缩略表
第1章 绪论
1.1 引言
1.2 禽流感及禽流感病毒概述
1.2.1 禽流感病毒的结构及分类
1.2.2 病毒的检测方法
1.3 电化学免疫分析法和电化学免疫传感器
1.3.1 电化学免疫分析法的原理
1.3.2 电化学免疫传感器的分类
1.3.3 电化学免疫分析中的信号标记及其放大策略
1.4 基于磁球的电化学免疫分析法
1.4.1 基于磁球的电化学免疫分析法的分类
1.4.2 小结
1.5 本论文的出发点与主要工作
参考文献
第2章 基于免疫磁分离和酶催化放大的禽流感病毒电化学免疫传感器
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 实验试剂与仪器
2.2.2 磁性金电极的设计和制作
2.2.3 辣根过氧化物酶修饰磁球(HRP-MB)的制备
2.2.4 免疫磁球的制备与表征
2.2.5 生物素化抗体的制备
2.2.6 H9N2禽流感病毒的检测步骤
2.2.7 特异性实验
2.2.8 复杂样品中禽流感病毒的检测
2.3 结果与讨论
2.3.1 基于磁球的电化学免疫传感器检测H9N2禽流感病毒的原理
2.3.2 免疫磁球的表征
2.3.3 HRP-MB在磁性电极上的电化学信号
2.3.4 检测条件的优化
2.3.5 禽流感病毒的检测
2.3.6 方法的特异性
2.3.7 鸡粪样品中H9N2禽流感病毒的检测
2.3.8 与直接在电极上构建的电化学免疫传感器相比较
2.4 结论
参考文献
第3章 基于免疫磁分离和双酶放大的禽流感病毒电化学免疫传感器
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 实验试剂与仪器
3.2.2 磁性电极的制作、修饰和表征
3.2.3 葡萄糖氧化酶修饰磁球(HRP-MB)的制备
3.2.4 基于磁球的双酶放大法检测H9N2禽流感病毒
3.2.5 特异性实验
3.2.6 复杂样品中H9N2禽流感病毒的检测
3.3 结果与讨论
3.3.1 层层自组装电极的表征
3.3.2 A-(Con A/HRP)3电极表面所固定的HRP米氏常数的计算
3.3.3 A-(Con A/HRP)3电极的重现性和稳定性
3.3.4 GOD-MB在HRP修饰磁性电极上的电化学信号
3.3.5 检测条件的优化
3.3.6 采用基于磁球的双酶放大法检测H9N2禽流感病毒
3.3.7 方法的特异性
3.3.8 复杂样品中H9N2禽流感病毒的检测
3.3.9 方法的普适性
3.4 结论
参考文献
第4章 基于免疫磁分离和酶促金属化的禽流感病毒电化学免疫传感器
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 实验试剂与仪器
4.2.2 磁性电极的设计和制作
4.2.3 禽流感病毒的检测
4.3 结果与讨论
4.3.1 检测原理
4.3.2 影响基于酶促金属化电化学信号的因素
4.3.3 禽流感病毒的检测
4.3.4 酶催化信号与酶促金属化信号的比较
4.3.5 与直接在电极上构建的电化学免疫传感器相比较
4.3.6 基于酶促金属化和双电极信号转换的信号放大策略
4.4 结论
参考文献
第5章 基于酶促金属化的比色分析法以及禽流感病毒的可视化检测
5.1 引言
5.2 实验部分
5.2.1 实验试剂与仪器
5.2.2 纳米金的制备及表征
5.2.3 酶促金属化反应机理
5.2.4 碱性磷酸酶的检测
5.2.5 禽流感病毒的检测
5.3 结果与讨论
5.3.1 基于酶促金属化检测碱性磷酸酶的原理
5.3.2 基于酶促金属化检测碱性磷酸酶的反应机理探讨
5.3.3 碱性磷酸酶的检测
5.3.4 可视化检测禽流感病毒
5.4 结论
参考文献
第6章 总结与展望
6.1 主要工作
6.2 展望
附录：攻读博士学位期间已发表和待发表的科研成果
致谢
本文编号：3784425
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