重组鸭瘟病毒载体中筛选高效表达鸭坦布苏病毒E蛋白启动子

发布时间：2023-04-07 04:45

　　【背景】鸭瘟和鸭坦布苏病毒是鸭的两种重要传染病,鸭瘟属于疱疹病毒科,具有开发成病毒载体的优势。为了优化鸭坦布苏病毒E基因在重组鸭瘟病毒载体中的表达,之前探讨了不同形式鸭坦布苏病毒E蛋白在重组鸭瘟病毒载体中的表达,发现以鸭为宿主进行密码子优化的E基因C端截短形式(E451-dk,简称为Es)表达量最高。【目的】探讨不同启动子对Es在重组鸭瘟病毒载体中表达的影响,为鸭瘟病毒—坦布苏病毒二联苗的研制奠定基础。【方法】将pCAG、 pSV40、pRSV、p1.8k(MDV)和pgB(MDV)启动子通过常规基因克隆的方法替换转移载体pEP-BGH-Es中的pCMV启动子,构建不同启动子调控Es表达的重组表达框pro-Es-BGH-pA。在鸭瘟病毒(DEV)疫苗株细菌人工染色体克隆pDEV-EF1的基础上,将5个重组表达框分别通过"Red E/T两步重组"克隆至pDEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带不同启动子调控的Es突变体克隆pDEV-pro-Es。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)拯救获得相应重组病毒rDEV-pro-Es,并对重组病毒感染细胞蚀斑大小和Es蛋白表达情...

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 菌株、质粒和病毒
    1.2 主要试剂
    1.3 细胞
    1.4 TUMV E蛋白DIII结构域多克隆抗体的制备
    1.5 引物设计及合成
    1.6 p EP-pro-Es质粒的构建
    1.7 重组鸭瘟病毒突变体BAC克隆的构建
    1.8 重组病毒的拯救
    1.9 重组病毒蚀斑大小的测定
    1.1 0 TUMV E蛋白DIII和DEV UL44多克隆抗体效价测定
    1.1 1 蛋白表达分析
2 结果
    2.1 重组鸭瘟病毒BAC突变体克隆的鉴定
    2.2 重组病毒的拯救
    2.3 病毒蚀斑面积测定
    2.4 外源蛋白Es表达分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3785119