应用CRISPR/Cas9敲低DEF细胞HMGB1基因对鸭坦布苏病毒复制的影响

发布时间：2023-04-10 21:31

　　鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)在鸭群中传播迅速,造成病鸭的死亡率在5%-30%之间。该病的发生和流行给我国的养鸭产业带来了巨大的经济损失。HMGB1(high mobility group box protein 1,HMGB1)是一种非组蛋白染色质相关的核蛋白,在细胞核内具有识别、结合及改变DNA内部结构的能力,最后参与了DNA的转录、复制和修复等过程。HMGB1可以通过促进树突状细胞表达CD40和CD80等细胞标记物,促使DC细胞的成熟和迁移,也在获得性免疫中扮演着重要角色。本研究探索CRISPR/Cas9慢病毒系统在DEF细胞内HMGB1基因的编辑,探索该病毒与宿主先天性免疫的互作机制。本实验最先使用CRISPR/Cas9方法敲低鸭胚成纤维(Duck embryo fibroblast,DEF)细胞中的鸭HMGB1(Duck HMGB1,duHMGB1)并感染DTMUV,第一次在原胚细胞的基础上对CRISPR/Cas9系统的活性及HMGB1基因介导DTMUV感染的免疫应答机制进行了验证。以duHMGB1为靶向基因,在DEF细胞敲低duHMGB1基...

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符号说明
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1 前言
    1.1 鸭坦布苏病毒研究状况概述
        1.1.1 鸭坦布苏病毒的概述
        1.1.2 DTMUV的命名
        1.1.3 DTMUV的分类
        1.1.4 DTMUV的病原学特征
        1.1.5 DTMUV的传播性
        1.1.6 鸭坦布苏病毒病的流行病学
        1.1.7 鸭坦布苏病毒病的诊断
        1.1.8 鸭坦布苏病毒病的防治
    1.2 HMGB1研究状况概述
        1.2.1 HMGB1概述
        1.2.2 HMGB1作用机制
        1.2.3 HMGB1的释放机制
        1.2.4 HMGB1的信号通路
    1.3 CRISPR研究状况概述
        1.3.1 CRISPR的发展史
        1.3.2 CRISPR的分类
        1.3.3 CRISPR的作用机制
    1.4 研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒株和细胞
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要溶液的配制
        2.1.4 主要设备
    2.2 方法
        2.2.1 DEF细胞的制备
        2.2.2 PCR反应测定
        2.2.3 Du HMGB1慢病毒体外感染
        2.2.4 du HMGB1慢病毒体外感染与DTMUV感染
        2.2.5 c DNA合成
        2.2.6 感染DTMUV的DEF细胞(敲低du HMGB1)中IFN-Ⅰ(IFN-α,IFN-β)和ISGs(PKR,Mx,OAS)m RNA表达量的变化。
3 结果与分析
    3.1 单载体电泳结果
    3.2 体外慢病毒感染
    3.3 敲低DEF细胞中du HMGB1后DTMUV复制情况
    3.4 敲低du HMGB1后感染DTMUV的DEF细胞中IFN-Ⅰ(IFN-α,IFN-β)m RNA表达量的变化
    3.5 敲低du HMGB1后感染DTMUV的DEF细胞中ISGs(PKR,Mx,OAS) m RNA表达量的变化
4 讨论
结论
参考文献
致谢



本文编号：3788766