奶牛乳腺炎病原菌感染模式与乳品质性状的相关性及耐药基因分析

发布时间：2023-04-11 20:59

　　奶牛乳腺炎是影响奶牛养殖业健康发展的最严重的制约因素之一,给整个产业链带来了严重的危害。本研究通过采集江苏、山东多家奶牛场乳腺炎奶样和常规奶样,开展奶牛乳腺炎流行病学调查,利用细菌学方法分离培养病原菌,16S rDNA测序鉴定,确定采样牧场乳腺炎病原菌流行状况,建立小型病原菌菌种库,结合奶牛场DHI测定,分析细菌感染模式和乳品质性状的相关性,在药敏试验基础上,检测主要流行菌肺炎克雷伯杆菌的耐药基因,为揭示奶牛乳腺炎病原菌感染规律和耐药机制,开展奶牛乳腺炎抗性选育提供实验依据。本研究主要包括以下几个方面。一、奶牛乳腺炎病原菌的分离和16S rDNA基因序列分析鉴定:对江苏、山东等地牧场进行流行病学调查,分离和鉴定乳腺炎病原菌。随机采集牧场1、牧场2、牧场3、和牧场4的常规乳样共882份(n1=223,n2=220,n3=193,n4=246),利用细菌学和16s rDNA测序确定病原菌种属。结果显示:牧场1的乳腺炎样本分离出11种病原菌39株;牧场2的乳腺炎样本分离出15种病原菌38株;牧场的乳腺炎样本分离出6种病原菌12株;牧场4乳腺炎样本分离出3种病原菌4株。牧场1的常规奶样分离出3...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
词汇缩略表
第一章 文献综述
    1 奶牛乳腺炎的分类及其致病菌
        1.1 奶牛乳腺炎的简介
        1.2 奶牛乳腺炎的分类
            1.2.1 隐性乳腺炎
            1.2.2 临床型乳腺炎
        1.3 奶牛乳腺炎的病原学特点
        1.4 乳腺炎病原菌致病机理研究进展
        1.5 乳腺炎病原菌分离鉴定方法研究进展
            1.5.1 传统细菌分离培养
            1.5.2 普通PCR技术
            1.5.3 多重PCR技术
            1.5.4 实时荧光定量PCR技术
            1.5.5 环介导等温扩增技术(LAMP)
            1.5.6 脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)
            1.5.7 基因芯片(Gene Chip, DNA Chip, cDNA Microaaray)
            1.5.8 16s rDNA测序技术
            1.5.9 高通量测序技术(High-throughput sequencing)
    2 细菌耐药机制
        2.1 抗生素外排泵
        2.2 抗生素降解/修饰
        2.3 自身靶点重编
        2.4 抗性传播
            2.4.1 细菌的可移动遗传元件
            2.4.2 可移动遗传元件的生物学意义
            2.4.3 可移动遗传元件的识别和鉴定
    3 肺炎克雷伯杆菌的研究进展
        3.1 肺炎克雷伯杆菌分子流行病学调查
        3.2 肺炎克雷伯杆菌引发奶牛乳腺炎症状
        3.3 肺炎克雷伯杆菌的致病性
        3.4 肺炎克雷伯杆菌耐药性
    5 本研究的目的和意义
第二章 奶牛乳腺炎病原菌的分离和16S rDNA基因序列分析鉴定
    1 材料与方法
        1.1 试剂与药品
        1.2 主要仪器
        1.3 奶样采集
        1.4 分离致病菌
        1.5 引物的合成
        1.6 病原菌DNA的提取
        1.7 PCR扩增和检测
    2 结果
        2.1 四个地区乳腺炎病原菌分离的结果
        2.2 四个地区非乳腺炎病原菌分离的结果
    3 讨论
第三章 奶牛乳腺炎病原菌感染模式与乳成分性状的关系
    1 材料与方法
        1.1 试剂与药品
        1.2 主要仪器
        1.3 奶样采集
        1.4 DHI的数据收集
        1.5 细菌感染模式
        1.6 数据统计分析
    2 结果
        2.1 奶样细菌感染模式
        2.2 不同感染模式对奶样乳成分变化的影响
        2.3 奶样不同SCC范围对乳成分变化的影响
    3 讨论
第四章 乳腺炎病原菌的药敏试验
    1 材料与方法
        1.1 试剂与药品
        1.2 主要仪器
        1.3 培养基的制备
        1.4 菌株的复苏
        1.5 药敏试验
    2 结果
    3 讨论
第五章 肺炎克雷伯杆菌的耐药基因的分子流行病学研究
    1 材料与方法
        1.1 试剂与药品
        1.2 主要仪器
        1.3 培养基的制备
        1.4 菌株的复苏
        1.5 药敏试验
        1.6 病原菌DNA的提取
        1.7 引物的合成
        1.8 PCR扩增和检测
        1.9 序列分析
    2 结果
        2.1 肺炎克雷伯杆菌的耐药率
        2.2 肺炎克雷伯杆菌的多重耐药结果
        2.3 可移动遗传元件遗传标记检测结果
    3 讨论
全文小结
参考文献
附录
    附录1: 其他常规奶样的测序比对结果
    附录2: 28种基因引物序列
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：3789738