绵羊肺炎支原体NM2010株P60基因的生物信息学分析及原核表达

发布时间：2023-04-12 05:10

　　为了探讨绵羊肺炎支原体NM2010株假定P60样脂蛋白用于制备基因工程亚单位疫苗的可能性,试验运用ExPASy、SignalP 4.0、TMHMM 2.0、SOPMA、 PSORT 6.4、IEDB、BlastP、Hcluster_sg、Muscle等生物信息学软件,对绵羊肺炎支原体NM2010株P60基因编码蛋白的理化性质、跨膜区、信号肽、二级结构、亚细胞定位、B细胞抗原表位、蛋白功能和基因家族进行预测分析。利用人工合成方法获得P60成熟肽编码区基因序列,并克隆到表达载体pET-32a(+)上进行原核表达及Western-blot分析。结果表明:绵羊肺炎支原体NM2010株P60基因编码蛋白的二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主,其结构稳定,可溶性较高;该编码蛋白有信号肽,亚细胞定位在外膜,可能是一种外膜蛋白,具有较好的抗原性;参与绵羊肺炎支原体烟酸和烟酰胺代谢途径,与绵羊肺炎支原体SC01株的GL000100(WP₀10321430.1)、猪肺炎支原体7448株的0353(WP₀11290189)属于同一家族,均为P60样...

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【文章目录】：
1 材料
    1.1 质粒和血清
    1.2 主要试剂
2 方法
    2.1 P60基因的生物信息学分析
        2.1.1 假定P60样脂蛋白理化性质分析
        2.1.2 信号肽与跨膜区预测
        2.1.3 二级结构预测
        2.1.4 亚细胞定位预测
        2.1.5 B细胞抗原表位预测
        2.1.6 假定P60样脂蛋白功能预测
        2.1.7 基因家族预测
    2.2 P60基因序列的人工合成
    2.3 重组蛋白的诱导表达
    2.4 重组蛋白的Western-blot分析
3 结果与分析
    3.1 P60基因的生物信息学分析
        3.1.1 假定P60样脂蛋白理化性质分析
        3.1.2 信号肽与跨膜区预测
        3.1.3 二级结构预测
        3.1.4 亚细胞定位预测
        3.1.5 B细胞抗原表位预测
        3.1.6 假定P60样脂蛋白功能预测
        3.1.7 基因家族预测
    3.2 P60基因序列的人工合成
    3.3 重组蛋白的诱导表达
    3.4 重组蛋白的Western-blot分析
4 讨论与结论



本文编号：3790498