巨型艾美耳球虫保定株的分离鉴定及免疫原性研究

发布时间：2023-04-22 07:24

　　巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)是集约化养鸡场最常见的3种球虫之一，主要感染3月龄以内的雏鸡，分布较广，致病力中等。小剂量感染时不会引起严重死亡，但造成饲料转化率低，降低雏鸡体增重，引起巨大的经济损失。鉴于该球虫对养鸡业的重要危害，国内外学者对其进行了大量研究。本试验通过分离获得该球虫纯种卵囊建立纯种传代系，对其进行一般生物学特性、致病性、免疫原性以及分子生物学等方面的研究，为巨型艾美耳球虫的深入研究奠定基础。 本研究采用单卵囊分离技术，从保定市某鸡场球虫混合感染的雏鸡粪便中，分离出疑似巨型艾美耳球虫。分离的球虫进行形态学和生活史观察，其寄生于小肠中段、卵囊为卵圆形、卵较大、卵囊壁金黄色。测100个卵囊的大小为(32.0-40.8)×(20.8-31.2)um，平均大小为36.4um×26.0um，卵囊形态指数为1.4。卵囊窄端有一折光性强的极体，无内外残体。最短孢子化时间为26h，完全孢子化时间为28h，潜隐期128h。鉴定为巨型艾美耳球虫，命名为巨型艾美耳球虫保定株。 分别用1×104、2×104、5×104、10×104个/只孢子化卵囊的剂量感染四组海兰灰公雏，对其...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 分类及生活史
        1.1.1 球虫分类
        1.1.2 生活史
    1.2 艾美耳球虫单卵囊分离
    1.3 艾美耳球虫虫株鉴定
        1.3.1 形态学鉴定
        1.3.2 PCR 技术
        1.3.3 同工酶技术
    1.4 艾美耳球虫的致病性
    1.5 巨型艾美耳球虫的免疫学特征
        1.5.1 球虫免疫原性
        1.5.2 球虫发育过程中的免疫原性
        1.5.3 淋巴细胞及抗体在鸡球虫病保护免疫中的作用
    1.6 本研究的目的意义
2 材料与方法
    2.1 巨型艾美耳球虫单卵囊的分离及鉴定
        2.1.1 主要试剂及溶液的配制
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 球虫混合卵囊的收集
        2.1.5 球虫单卵囊的分离
        2.1.6 单卵囊分离感染成功率
        2.1.7 单卵囊二代增殖
        2.1.8 球虫卵囊形态学鉴定
        2.1.9 潜隐期的测定
        2.1.10 最短孢子化时间的测定
        2.1.11 寄生部位的检查
        2.1.12 球虫卵囊的纯化
        2.1.13 球虫卵囊 DNA 制备
        2.1.14 引物设计与合成
        2.1.15 PCR 产物的的纯化与回收
        2.1.16 扩增片段的测序及同源性分析
    2.2 巨型艾美耳球虫的致病性研究
        2.2.1 巨型艾美耳球虫虫株
        2.2.2 试验动物
        2.2.3 接种卵囊计数及雏鸡分组
        2.2.4 粪便情况
        2.2.5 小肠病变记分
        2.2.6 卵囊排出情况
        2.2.7 体增重
    2.3 巨型艾美耳球虫的免疫原性研究
        2.3.1 巨型艾美耳球虫虫株
        2.3.2 试验动物
        2.3.3 主要溶液的配制
        2.3.4 主要试剂及仪器设备
        2.3.5 雏鸡免疫分组
        2.3.6 血清中 IgG 含量测定
        2.3.7 T 淋巴细胞增殖试验
        2.3.8 数据处理
        2.3.9 体增重
        2.3.10 肠道病变值的判定
        2.3.11 OPG 值（克粪便卵囊数）
3 结果
    3.1 球虫卵囊形态学及分子生物学鉴定结果
        3.1.1 单卵囊分离结果
        3.1.2 分离虫株的生物学特性
        3.1.3 卵囊纯化结果
        3.1.4 PCR 扩增结果
        3.1.5 胶回收结果
        3.1.6 序列测定及同源性分析结果
        3.1.7 系统发生分析
    3.2 巨型艾美耳球虫致病性研究
        3.2.1 人工感染球虫卵囊临床症状
        3.2.2 剖检小肠病变记分和血便记分
        3.2.3 增重及死亡情况
        3.2.4 卵囊排出情况
    3.3 巨型艾美耳球虫免疫原性研究
        3.3.1 血清 IgG 抗体含量检测结果
        3.3.2 外周血 T 淋巴细胞增殖结果
        3.3.3 增重情况
        3.3.4 肠道病变记分
        3.3.5 卵囊计数（OPG 值）
4 讨论
    4.1 单卵囊分离技术及虫种鉴定
    4.2 鸡球虫的致病性
    4.3 鸡球虫的免疫原性
5 结论
6 参考文献
在读期间发表的学术论文
作者简历
致谢



本文编号：3797187