天府肉羊TNNT1、TNNT2和TNNI2基因的克隆以及组织表达

发布时间：2023-04-22 19:39

　　骨骼肌占产肉动物躯体的40%,是动物躯体中最重要的组成部分,也是影响肌肉品质的重要因素之一,因而影响肉质生产的骨骼肌基因是家畜分子育种工作中重要的候选基因。肌钙蛋白12型(TNNI2)基因和肌钙蛋白T1 (TNNTl)作为快骨骼肌基因,在动物骨骼肌生长发育过程中起着重要的调控作用,是影响动物屠宰性能的重要功能基因：肌钙蛋白T2 (TNNT2)作为心肌亚型在影响心肌组织的正常活动方面具有很大的研究价值。本研究运用RT-PCR结合克隆测序方法分别获得了天府肉羊TNNT1、TNN12和TNNT2基因的全编码区序列。结果显示：TNNT1基因CDS区长度是759 bp,编码252个氨基酸,得到的蛋白序列含有一个保守结构域,7个磷酸化位点,且该蛋白质的二级结构只具有α-螺旋和无规则卷曲,没有延伸片段,提交NCBI获得登录号：KF939315; TNNT2基因具有较长的CDS区858 bp,编码285个氨基酸,蛋白序列含有15个磷酸化位点和一个保守结构域,蛋白二级结构主要为无规则卷曲和α-螺旋,提交NCBI得到登录号KF939316；克隆出天府肉羊的TNNI2基因,在NBCI数据库中blast,发现...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
常用词语缩写
1 文献综述
    1.1 TNNT1和TNNT2基因的研究进展
        1.1.1 TNNT基因的结构
        1.1.2 TNNT基因的进展
    1.2 TNNI2基因的研究进展
        1.2.1 TNNI2基因的简述
        1.2.2 TNNI2基因的研究现状
    1.3 本研究的目的意义
2 材料和方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物和样品采集
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 试验试剂
        2.1.4 试剂配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 总RNA的提取
        2.2.2 提取RNA浓度的检测
        2.2.3 cDNA合成
        2.2.4 试验引物的设计
        2.2.5 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因的克隆及测序
        2.2.6 荧光定量PCR
        2.2.7 蛋白质免疫杂交(Western Blot)
3 结果与分析
    3.1 总RNA检测
    3.2 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因克隆与序列分析
        3.2.1 TNNT1基因RT-PCR结果
        3.2.2 TNNT1基因的克隆测序
        3.2.3 TNNI1序列比对结果
        3.2.4 构建TNNT1进化树
        3.2.5 TNNT1蛋白理化性质
        3.2.6 TNNT2基因RT-PCR结果
        3.2.7 TNNT2基因的克隆测序
        3.2.8 TNNT2序列比对结果
        3.2.9 构建TNNT2进化树
        3.2.10 TNNT2蛋白理化性质
        3.2.11 TNNI2基因RT-PCR结果
        3.2.12 TNNI2基因的克隆测序
        3.2.13 TNNI2序列比对结果
        3.2.14 TNNI2进化树的构建
        3.2.15 TNNI2氨基酸序列分析
    3.3 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因在mRNA水平的表达量
        3.3.1 定量引物的验证
        3.3.2 目的基因与内参基因的熔解曲线和标准曲线
        3.3.3 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因在组织中表达情况
    3.4 TNNT1蛋白在组织中表达差异
    3.5 TNNT1在组织中蛋白表达与mRNA水平表达的相关性分析
4 讨论
    4.1 克隆cDNA序列分析
    4.2 TNNT1、TNNT2和TNNI2蛋白结构和功能分析
    4.3 TNNT1、TNNT2和TNNI2基因的组织表达分析
        4.3.1 TNNT1基因的荧光定量表达分析
        4.3.2 TNNT2基因的荧光定量表达分析
        4.3.3 TNNI2基因的组织表达分析
    4.4 TNNT1蛋白的表达分析
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3798281