Ghrelin对奶山羊泌乳调节作用研究

发布时间：2023-04-23 00:59

　　Ghrelin是从大鼠胃中分离纯化得到的含有28氨基酸残基的活性肽，参与摄食、生长激素(growth hormone，GH)分泌、能量平衡、免疫、生殖和泌乳等多种生理功能的调节，有关Ghrelin对泌乳调控的研究资料较少，且大部分都是从鼠上获得的。本文以奶山羊为研究对象，通过检测Ghrelin和GHSR-1a在奶山羊体内的表达分布和各泌乳相关激素在泌乳周期变化规律，确定Ghrelin对奶山羊泌乳的调节作用，检测Ghrelin对离体乳腺组织和乳腺上皮细胞功能影响，进一步确定Ghrelin对乳腺泌乳活动的调节作用。研究取得如下结果。 1. Ghrelin及其受体GHSR-1a mRNA在成年奶山羊消化道、下丘脑、垂体、卵巢和乳腺组织中均有表达，在消化道，皱胃Ghrelin mRNA和蛋白表达量最高，Ghrelin和GHSR-1a阳性细胞在整个消化道都有分布，在皱胃，Ghrelin阳性细胞大体可分为开放和闭锁两种类型，在肠道，Ghrelin阳性细胞大部分分布于肠腺上皮之间，而在食道、瘤胃和网胃中，Ghrelin阳性细胞多为复层鳞状上皮的基底细胞。GHSR-1a阳性细胞多分布于消化道的神经节细...

【文章页数】：124 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
文献综述
    第一章 Ghrelin 研究进展
        1.1 Ghrelin 的发现
        1.2 Ghrelin 基因、蛋白结构及其合成
        1.3 Ghrelin 的活化
        1.4 Ghrelin 组织分布
        1.5 Ghrelin 生物学功能
            1.5.1 Ghrelin 促进摄食、调节体重、参与能量平衡的调节
            1.5.2 Ghrelin 促进 GH 释放
            1.5.3 Ghrelin 对生殖的调节作用
            1.5.4 Ghrelin 对免疫系统影响
            1.5.5 Ghrelin 对细胞增殖的影响
            1.5.6 Ghrelin 对心血管功能的影响
            1.5.7 Ghrelin 对记忆的影响
            1.5.8 Ghrelin 其他作用
        1.6 Ghrelin 作用的中枢途径
        1.7 Ghrelin 缺失及其生物学活性的封闭
            1.7.1 Ghrelin 的敲除
            1.7.2 Ghrelin 作用的拮抗
            1.7.3 GOAT 作用的抑制
        1.8 Ghrelin 受体 GHSR 的研究进展
            1.8.1 GHSR 的基因、蛋白结构及相关功能
            1.8.2 GHSR 组织分布
        1.9 Ghrelin 与泌乳
        1.10 展望
    第二章 泌乳调节研究进展
        2.1 泌乳的启动、维持和排乳
        2.2 泌乳调节的相关激素
            2.2.1 P 的调节作用
            2.2.2 E 的调节作用
            2.2.3 GCS 的调节作用
            2.2.4 PRL 的调节作用
            2.2.5 GH 的调节作用
            2.2.6 氢化可的松的调节作用
            2.2.7 INS 的调节作用
            2.2.8 胰高血糖素的调节作用
            2.2.9 Ghrelin 的调节作用
        2.3 本研究的目的和意义
实验研究
    第三章 Ghrelin 和 GHSR-1a 在奶山羊体内的表达
        3.1 材料
            3.1.1 样品采集
            3.1.2 主要试剂
            3.1.3 主要仪器
        3.2 方法
            3.2.1 组织总 RNA 的提取
            3.2.2 cDNA 合成
            3.2.3 PCR 扩增
            3.2.4 qRT-PCR 检测
            3.2.5 WB 检测
            3.2.6 IHC 染色
            3.2.7 数据分析
        3.3 结果
            3.3.1 Ghrelin 和 GHSR-1a mRNA 在奶山羊体内的表达
            3.3.2 Ghrelin 和 GHSR-1a mRNA 在各组织表达水平
            3.3.3 Ghrelin 和 GHSR-1a 在奶山羊消化道的分布
            3.3.4 Ghrelin 和 GHSR-1a 蛋白表达水平
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 Ghrelin 和 GHSR-1a 在泌乳期奶山羊乳腺组织的表达及变化规律
        4.1 材料
            4.1.1 试验动物
            4.1.2 样品采集
            4.1.3 主要试剂
            4.1.4 主要仪器
        4.2 方法
            4.2.1 组织总 RNA 的提取
            4.2.2 cDNA 合成
            4.2.3 PCR 扩增
            4.2.4 qRT-PCR 检测
            4.2.5 WB 检测
            4.2.6 IHC 染色
            4.2.7 免疫荧光染色（immunofluorescence，IF）
            4.2.8 数据分析
        4.3 结果
            4.3.1 泌乳期奶产量曲线图
            4.3.2 Ghrelin、GHSR-1a 和β-casein 基因转录检测
            4.3.3 β-casein 的溶解曲线和标准曲线
            4.3.4 Ghrelin、GHSR-1a 和β-casein 基因转录水平
            4.3.5 Ghrelin 及其受体 GHSR-1a 免疫阳性细胞检测
            4.3.6 Ghrelin、GHSR-1a 和β-casein 蛋白表达水平
        4.4 讨论
        4.5 小结
    第五章 泌乳期奶山羊 Ghrelin、GHSR-1a、GH、GHRH 和 SST 的变化规律
        5.1 材料
            5.1.1 试验动物
            5.1.2 样品采集
            5.1.3 主要试剂
            5.1.4 主要仪器
        5.2 方法
            5.2.1 组织总 RNA 的提取
            5.2.2 cDNA 合成
            5.2.3 PCR 扩增
            5.2.4 qRT-PCR 检测
            5.2.5 WB 检测
            5.2.6 数据分析
        5.3 结果
            5.3.1 GH、GHRH 和 SST 引物检测结果
            5.3.2 GH、GHRH 和 SST 的溶解曲线和标准曲线
            5.3.3 Ghrelin、GHSR-1a、GH、GHRH 和 SST 基因转录水平
            5.3.4 Ghrelin、GHSR-1a、GH、GHRH 和 SST 蛋白表达水平
        5.4 讨论
        5.5 小结
    第六章 Ghrelin 对奶山羊乳腺组织分泌β-casein 的影响
        6.1 材料
            6.1.1 样品
            6.1.2 主要试剂
            6.1.3 主要仪器
        6.2 方法
            6.2.1 乳腺组织的获取
            6.2.2 乳腺组织块的培养及处理
            6.2.3 组织总 RNA 的提取
            6.2.4 cDNA 的合成
            6.2.5 qRT-PCR 检测
            6.2.6 WB 检测
            6.2.7 数据分析
        6.3 结果
            6.3.1 梯度浓度 Ghrelin 处理乳腺组织后β-casein 基因转录水平
            6.3.2 同一浓度 Ghrelin 处理乳腺组织不同时间β-casein 基因转录水平
            6.3.3 Ghrelin 抑制剂对乳腺组织β-casein 基因转录水平的影响
            6.3.4 梯度浓度 Ghrelin 处理乳腺组织后β-casein 蛋白表达水平
            6.3.5 同一浓度 Ghrelin 处理乳腺组织不同时间β-casein 蛋白表达水平
            6.3.6 Ghrelin 抑制剂对乳腺组织β-casein 蛋白表达水平的影响
        6.4 讨论
        6.5 小结
    第七章 Ghrelin 对奶山羊乳腺上皮细胞分泌β-casein 的影响
        7.1 材料
            7.1.1 细胞
            7.1.2 主要试剂
            7.1.3 主要仪器
        7.2 方法
            7.2.1 原代乳腺上皮细胞的分离
            7.2.2 原代上皮细胞的处理
            7.2.3 细胞总 RNA 的提取
            7.2.4 cDNA 合成
            7.2.5 PCR 扩增
            7.2.6 qRT-PCR 检测
            7.2.7 WB 检测
            7.2.8 IF 染色
            7.2.9 ICC 染色
            7.2.10 MTT 检测
            7.2.11 数据分析
        7.3 结果
            7.3.1 原代乳腺上皮细胞鉴定
            7.3.2 Ghrelin 和 GHSR-1a 在原代乳腺上皮细胞的表达
            7.3.3 梯度浓度 Ghrelin 处理乳腺上皮细胞β-casein 基因转录水平
            7.3.4 Ghrelin 处理乳腺上皮细胞不同时间β-casein 基因转录水平
            7.3.5 Ghrelin 抑制剂对乳腺上皮细胞β-casein 基因转录水平的影响
            7.3.6 梯度浓度 Ghrelin 处理原代乳腺上皮细胞β-casein 蛋白表达水平
            7.3.7 Ghrelin 处理乳腺上皮细胞不同时间β-casein 蛋白表达水平
            7.3.8 Ghrelin 抑制剂对原代乳腺上皮细胞β-casein 蛋白表达水平的影响
            7.3.9 Ghrelin 对奶山羊原代乳腺上皮细胞增殖的影响
        7.4 讨论
        7.5 小结
结论与创新点
    结论
    创新点
参考文献
主要缩略词和中英文对照表
致谢
作者简介



本文编号：3798758