鸡大肠埃希菌耐药基因检测与表达及其耐药相关性分析

发布时间：2023-04-25 00:03

　　鸡致病性大肠埃希菌(Escherichia coli)是引起鸡感染的重要病原菌之一,对养鸡业危害严重。针对大肠埃希菌耐药严峻的状况,加强大肠埃希菌耐药性研究具有重要意义。本研究以鸡源致病性大肠埃希菌徐州分离株为研究对象,检测其耐药表型和耐药基因,在构建耐药基因重组菌的基础上探讨了耐药表型与耐药基因间的相关性,从而为临床用药提供理论支持,为寻找药物作用靶点,研发新型抗菌药物奠定基础。主要研究内容包括：1.鸡致病性大肠埃希菌的分离鉴定从4批疑似患大肠杆菌病病鸡体内分离鉴定致病性大肠埃希菌,作为后续试验菌株。采用常规细菌分离培养方法结合人工感染试验从病鸡肝脏分离获得2株致病菌,分别命名为CE和SE菌株。根据其染色特性、菌落特征和生化特性进行初步鉴定；然后进行16S rDNA基因PCR扩增和序列分析。结果显示,2株分离菌为G短杆菌,散在排列；在伊红-美蓝(EMB)培养基上生长出典型的具有金属光泽的墨绿色菌落；生化特性符合《伯杰氏细菌鉴定手册》中大肠埃希菌属(Escherichia sp.)细菌的特性。分离菌株16S rDNA基因大小分别为1 502 bp和1 503 bp,与大肠埃希菌标准株(...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词表
文献综述
引言
1 材料与方法
    1.1 工程菌与质粒
    1.2 主要试剂
    1.3 实验动物
    1.4 主要培养基与溶液配制
        1.4.1 主要培养基
        1.4.2 琼脂糖凝胶电泳所需溶液
        1.4.3 蛋白电泳检测溶液
        1.4.4 蛋白诱导表达所需溶液
    1.5 主要仪器
    1.6 鸡致病性大肠埃希菌的分离鉴定
        1.6.1 细菌分离培养与纯化
        1.6.2 细菌鉴定
        1.6.3 细菌人工感染试验
    1.7 鸡致病性大肠埃希菌的耐药性分析
        1.7.1 耐药表型分析
        1.7.2 耐药基因检测及其生物信息学分析
    1.8 耐药基因重组菌的构建与表达
        1.8.1 耐药基因的PCR扩增
        1.8.2 耐药基因重组表达质粒的构建
        1.8.3 重组表达质粒的鉴定
        1.8.4 耐药基因重组菌的表达与产物分析
    1.9 耐药基因与耐药表型相关性分析
        1.9.1 耐药重组菌的耐药表型分析
        1.9.2 抗菌药物对耐药重组菌生长的影响
2 结果与分析
    2.1 细菌分离与鉴定
        2.1.1 分离菌的表型特征
        2.1.2 细菌16S rDNA鉴定结果
        2.1.3 细菌人工感染结果
    2.2 大肠埃希菌分离株的耐药表型
    2.3 大肠埃希菌分离株携带的耐药基因
    2.4 耐药基因的生物信息学分析
        2.4.1 β-类酰胺类耐药基因Bla-TEM的生物信息学分析
        2.4.2 氨基糖苷类耐药基因Aac(3)的生物信息学分析
        2.4.3 多重耐药基因AcrA的生物信息学分析
        2.4.4 四环素类耐药基因TetA的生物信息学分析
    2.5 重组表达质粒的构建与鉴定
        2.5.1 Bla-TEM、Aac(3)和TetA基因的PCR扩增
        2.5.2 重组表达质粒的鉴定
        2.5.3 重组融合蛋白的诱导表达
    2.6 耐药基因与细菌耐药的相关性分析
        2.6.1 重组前后E.coli BL21(DE3)的耐药表型
        2.6.2 抗菌药物对重组前后E.coli BL21(DE3)生长的影响
3 讨论
    3.1 鸡源大肠埃希菌的致病性及耐药状况
    3.2 耐药基因与耐药表型的相关性分析
    3.3 耐药基因表达的研究意义
4 结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3800295