新疆石河子地区羊传染性脓疱病毒的分离鉴定及其119基因缺失株研究

发布时间：2023-04-29 03:06

　　本研究采集了新疆石河子地区疑似羊传染性脓疱病毒（ORFV）感染的发病山羊唇部结痂病料，通过病毒检测、分离和鉴定。以ORFV分离株为研究对象，分别克隆了ORFV分离株主要保护性抗原基因B2L和F1L，以及3个毒力基因VIR、GIF和VGEF，并进行了测序和遗传进化分析，从分子水平上证实了ORFV石河子流行株发生了遗传变异。以ORFV-SHZ1为研究对象，通过同源重组的方法构建了ORFV119基因的缺失株，并对其滴度、生长特性和遗传稳定性进行了初步研究。本研究为新疆地区ORFV的科学防控和疫苗研发奠定了前期基础。研究方法和主要结果如下： 1．ORFV石河子流行株的分离鉴定 采集新疆石河子地区疑似羊传染性脓疱病毒（ORFV）感染的羔羊唇部结痂病料，用ORFV B2L基因特异性引物扩增，筛选出ORFV阳性病料。将ORFV阳性病料碾磨和无菌处理后，接种Veroa细胞进行病毒分离。在盲传五代后出现典型的细胞病变，经电镜负染观察在细胞培养上清液中观察到外观呈椭圆形、有囊膜、表面呈绳索样结构排列的副痘病毒粒子。超薄切片显示，细胞内有成熟的病毒粒子。用纯化病毒液划痕接种2月龄羔羊进行动物回归实验，接种后...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
中英文缩写词
第一章 文献综述
第二章 实验内容
    实验一 羊传染性脓疱病毒石河子流行株的分离鉴定
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 PCR 检测
            2.2 ORFVSHZ1 株 B2L 基因核苷酸及推导氨基酸的序列分析
            2.3 病毒分离
            2.4 病毒学鉴定结果
            2.5 ORFV分离株TCID50的测定
            2.6 动物接种实验
        3 讨论
    实验二 羊传染性脓疱病毒石河子流行株部分重要抗原及毒力基因的克隆和遗传进化分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 ORFV 石河子流行株 B2L、F1L、VIR、GIF 及 VEGF 基因的 PCR 扩增结果
            2.2 重组质粒的菌液 PCR 鉴定
            2.3 ORFV 石河子流行株 SHZ1 株 B2L、F1L、VIR、GIF 及 VEGF 基因测序结果
            2.4 ORFV 石河子流行株 B2L、F1L、VIR、GIF 及 VEGF 基因的核苷酸及氨基酸同源性分析
            2.5 ORFV 石河子流行株 B2L、F1L、VIR、GIF 及 VEGF 基因的遗传进化分析
        3 讨论
    实验三 羊传染性脓疱病毒 119 基因缺失株的构建及鉴定研究
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 穿梭载体的构建
            2.2 重组病毒的纯化与鉴定
            2.3 重组病毒与亲本毒株 TCID50比较
            2.4 重组病毒在 Vero 细胞生长特性分析
            2.5 重组病毒的遗传稳定性
        3 讨论
全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
在学校期间参与的研究课题
获奖情况
发表论文



本文编号：3805037