皮质醇对LPS诱导的BEECs和RAW264.7细胞的炎性损伤调控机制的研究

发布时间：2023-04-30 04:00

　　皮质醇作为一种内源性糖皮质激素,在机体的正常生理功能中起着重要的调控作用。在奶牛围产期,由于受到多种应激刺激,如妊娠应激、分娩应激、泌乳应激和代谢应激等,皮质醇浓度会出现较大范围的波动性升高。而且在这个阶段,奶牛易患多种生殖道疾病。奶牛产后子宫内膜炎是导致奶牛生殖障碍的主要原因,也给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。奶牛分娩后,子宫颈处于开放状态,几乎所有奶牛生殖道都会被细菌污染,大肠杆菌是造成奶牛子宫内膜炎的主要致病菌。目前临床预防及治疗奶牛子宫内膜炎的方法很多,但是没有标准的治疗方案并且预后不是很理想,导致很大的淘汰率。糖皮质激素在临床上一直应用于控制炎性疾病,对抑制各种病原引起的炎症反应有效,但是内源性糖皮质激素对子宫内膜炎的调控作用鲜有报道。本研究以原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)和小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)为研究对象,利用LPS处理细胞制作炎症模型,并利用不同浓度的皮质醇处理,然后通过CCK-8法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫荧光等方法,探索皮质醇对LPS诱导的BEECs和RAW264.7细胞相关细胞因子及信号通路的影响,以阐明皮质醇对LPS诱导的该细胞...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一部分 前言
    第一章 奶牛子宫内膜炎的危害与研究进展
        1 产后常见的子宫疾病
            1.1 子宫炎
            1.2 临床型子宫内膜炎
            1.3 亚临床型子宫内膜炎
            1.4 子宫蓄脓
        2 子宫疾病对生产能力的影响
        3 产后子宫疾病的发病机制
            3.1 细菌感染
            3.2 病毒感染
            3.3 子宫疾病与先天免疫
        4 子宫疾病的诊断
        5 子宫内膜炎的治疗
            5.1 抗生素的疗效
            5.2 PGF_2α的疗效
        6 子宫疾病的预防
        7 激素与免疫
    第二章 皮质醇与细胞炎性相关信号通路的关系
        1 巨噬细胞和上皮细胞与先天免疫或炎症的关系
        2 皮质醇与先天免疫或炎症的关系
        3 LPS对细胞的作用
        4 NF-κB信号通路
        5 MAPK信号通路
    第三章 皮质醇与增殖相关通路的关系
        1 皮质醇与细胞增殖的关系
        2 与组织修复相关的生长因子
        3 Wnt/β-catenin信号通路
        4 PI3K/AKT信号通路
    参考文献
第二部分 试验研究
    第一章 LPS对BEECs和RAW264.7细胞NF-KB和MAPK信号通路的影响
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 主要仪器
            1.3 主要化学试剂
        2 方法
            2.1 原代奶牛子宫内膜上皮细胞的培养
            2.2 细胞传代
            2.3 免疫组化鉴定奶牛子宫内膜上皮细胞
            2.4 奶牛子宫内膜上皮细胞的生长曲线测定
            2.5 Western Blot检测NF-κB和MAPK通路关键蛋白的表达水平
            2.6 统计分析
        3 结果
            3.1 奶牛子宫内膜上皮细胞的培养结果
            3.2 奶牛子宫内膜上皮细胞的角蛋白-18免疫组化鉴定结果
            3.3 奶牛子宫内膜上皮细胞的生长曲线
            3.4 LPS对BEECs和RAW264.7细胞NF-κB信号通路的影响
            3.5 LPS对BEECs和RAW264.7细胞MAPK信号通路的影响
        4 讨论
        参考文献
    第二章 皮质醇对LPS诱导的BEECs和RAW264.7细胞INOS和COX-2表达的影响
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 实验仪器
            1.3 主要化学试剂
        2 方法
            2.1 奶牛子宫内膜上皮细胞的培养
            2.2 细胞传代
            2.3 CCK-8检测BEECs和RAW264.7细胞的活性
            2.4 ELISA法检测培养液中炎性介质PGE2的浓度
            2.5 qRT-PCR检测细胞iNOS和COX-2的基因表达水平
            2.6 Western Blot检测细胞iNOS和COX-2蛋白的表达变化
            2.7 统计分析
        3 结果
            3.1 BEECs和RAW264.7细胞的活性变化
            3.2 RAW264.7细胞培养液中PGE2的含量变化
            3.3 BEECs和RAW264.7细胞iNOS与COX-2的基因表达变化
            3.4 RAW264.7细胞iNOS和COX-2的蛋白表达变化
        4 讨论
        参考文献
    第三章 皮质醇对LPS诱导的BEECs和RAW264.7细胞NF-KB和MAPK信号通路的影响
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 实验仪器
            1.3 主要化学试剂
        2 方法
            2.1 奶牛子宫内膜上皮细胞培养
            2.2 细胞传代
            2.3 ELISA检测相关炎性因子的含量
            2.4 qRT-PCR检测细胞的炎性因子基因表达变化
            2.5 Western Blot检测NF-κB和MAPK通路关键蛋白的表达水平
            2.6 免疫荧光法检测奶牛子宫内膜上皮细胞p65的表达
            2.7 统计分析
        3 结果
            3.1 RAW264.7细胞培养液中相关炎性因子的含量变化
            3.2 BEECs和RAW264.7细胞相关炎性因子基因的表达情况
            3.3 BEECs和RAW264.7细胞的NF-κB通路变化
            3.4 BEECs的NF-κB p65蛋白核转位情况
            3.5 BEECs和RAW264.7细胞的MAPK通路变化
        4 讨论
        参考文献
    第四章 皮质醇对LPS诱导的BEECs损伤修复机制的研究
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 实验仪器
            1.3 主要化学试剂
        2 方法
            2.1 奶牛子宫内膜上皮细胞培养
            2.2 细胞传代
            2.3 qRT-PCR检测细胞的相关生长因子基因表达变化
            2.4 Western Blot检测Wnt/β-catenin和PI3K/AKT通路关键蛋白的表达
            2.5 免疫荧光法检测BEECs中β-catenin的表达
            2.6 统计分析
        3 结果
            3.1 BEECs的相关生长因子基因的表达情况
            3.2 BEECs的Wnt/β-catenin通路变化
            3.3 BEECs的β-catenin蛋白核转位情况
            3.4 BEECs的PI3K/AKT通路变化
        4 讨论
    参考文献
结论
攻读学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3806377