细胞因子对PCV2-Cap蛋白免疫增强作用及Cap与FMDV-Vp1共表达产物免疫原性鉴定

发布时间：2023-05-03 13:13

　　猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2, PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Post-weaning multisystemic wasting syndrome, PMWS）的主要病原，该病原现已在世界各地广泛流行，给养猪业造成巨大经济损失。PCV2含2个主要的开放阅读框ORF1和ORF2，分别编码与病毒复制相关的蛋白Rep和Rep’以及病毒的结构蛋白Cap。Cap蛋白是PCV2的主要免疫保护性抗原，能诱导动物机体产生针对PCV2的中和抗体和保护性免疫力，是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明，IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子佐剂对疫苗具有免疫增强作用，可显著增强疫苗的免疫保护效力。本研究采用细胞因子佐剂与PCV2-Cap蛋白组合的策略来研制预防PCV2感染的新型基因工程亚单位疫苗，目的是验证猪源IFN-γ（PoIFN-γ）、IL-2（PoIL-2）和GM-CSF（PoGM-CSF）这3种细胞因子能否增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效力。 为鉴定PoIFN-γ对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫增强作用，以杆状病毒表达...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 PCV2 病原学
        1.1.1 分类
        1.1.2 理化特性
        1.1.3 基因组结构与功能
    1.2 PCV2 疫苗的研究进展
        1.2.1 灭活疫苗
        1.2.2 弱毒疫苗
        1.2.3 基因工程疫苗
        1.2.4 展望
    1.3 细胞因子佐剂研究进展
        1.3.1 细胞因子概述
        1.3.2 干扰素
        1.3.3 白细胞介素
        1.3.4 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
    1.4 FMDV 病原学
        1.4.1 分类
        1.4.2 形态结构和理化特性
        1.4.3 基因组结构与功能
    1.5 FMDV 疫苗的研究进展
        1.5.1 灭活疫苗
        1.5.2 弱毒疫苗
        1.5.3 基因工程疫苗
        1.5.4 展望
    1.6 研究的目的和意义
第二章 猪 IFN-γ对 PCV2-Cap 蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究
    摘要
    2.1 材料和方法
        2.1.1 质粒、菌株、细胞和主要试剂
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 重组杆状病毒的构建
        2.1.4 目的蛋白的表达及鉴定
        2.1.5 三种 PCV2 亚单位疫苗的制备
        2.1.6 鼠体免疫攻毒试验
        2.1.7 血清学试验
        2.1.8 淋巴细胞增殖试验
        2.1.9 PCV2 病毒血症检测
        2.1.10 荧光定量 PCR 检测 PCV2 病毒载量
        2.1.11 统计分析
    2.2 结果
        2.2.1 目的基因的 PCR 扩增
        2.2.2 重组转移载体的鉴定
        2.2.3 重组杆粒的 PCR 鉴定
        2.2.4 目的蛋白表达的鉴定
        2.2.5 PCV2 特异性体液免疫应答
        2.2.6 PCV2 特异性淋巴细胞增殖反应
        2.2.7 PCV2 病毒血症检测
        2.2.8 PCV2 病毒载量检测
    2.3 讨论
第三章 猪 IL-2 与猪 GM-CSF 对 PCV2-Cap 蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究
    摘要
    3.1 材料和方法
        3.1.1 质粒、菌株、细胞和主要试剂
        3.1.2 主要仪器设备
        3.1.3 重组杆状病毒的构建
        3.1.4 目的蛋白的表达及鉴定
        3.1.5 五种 PCV2 亚单位疫苗的制备
        3.1.6 鼠体免疫攻毒试验
        3.1.7 PCV2 特异性 IPMA 抗体检测
        3.1.8 淋巴细胞增殖试验
        3.1.9 细胞因子检测
        3.1.10 PCV2 病毒血症检测
        3.1.11 PCV2 病毒载量检测
        3.1.12 统计分析
    3.2 结果
        3.2.1 重组转移载体的鉴定
        3.2.2 重组杆粒的 PCR 鉴定
        3.2.3 目的蛋白表达的 Western blot 鉴定
        3.2.4 PCV2 特异性 IPMA 抗体检测
        3.2.5 PCV2 特异性淋巴细胞增殖反应
        3.2.6 细胞因子检测
        3.2.7 PCV2 病毒血症检测
        3.2.8 PCV2 病毒载量检测
    3.3 讨论
第四章 PCV2-Cap 蛋白与 FMDV-Vp1 蛋白共表达及免疫原性鉴定
    摘要
    4.1 材料和方法
        4.1.1 质粒、菌株、细胞和主要试剂
        4.1.2 主要仪器设备
        4.1.3 重组杆状病毒的构建
        4.1.4 目的蛋白的表达及鉴定
        4.1.5 PCV2 与 FMDV 二联亚单位疫苗的制备
        4.1.6 鼠体免疫试验
        4.1.7 PCV2 特异性 IPMA 抗体检测
        4.1.8 FMDV 特异性抗体检测
        4.1.9 统计分析
    4.2 结果
        4.2.1 目的基因的 PCR 扩增
        4.2.2 重组转移载体的鉴定
        4.2.3 重组杆粒的 PCR 鉴定
        4.2.4 目的蛋白表达的 Western blot 鉴定
        4.2.5 PCV2 特异性 IPMA 抗体检测
        4.2.6 FMDV 特异性抗体检测
    4.3 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3806766